吡格列酮通过Wnt/β-catenin信号通路减轻大鼠血管平滑肌细胞钙化
发布时间：2021-01-18 08:11
目的:探讨过氧化物酶体增殖物活化受体γ（PPARγ）激动剂吡格列酮（PIO）对高磷诱导大鼠血管平滑肌细胞（VSMC）钙化的作用及其相关机制。方法:利用10 mmol/Lβ甘油磷酸（β-GP）诱导大鼠VSMC钙化,建立钙化模型（即钙化组）;同时以完全培养基培养大鼠VSMC为正常对照组,并分别以不同浓度（5μmol/L、10μmol/L、15μmol/L、20μmol/L）PIO干预,观察培养12d,用茜素红染色法检测细胞钙沉积并检测细胞外基质钙离子浓度来观察VSMC钙化程度。Western Blot检测大鼠VSMC的α平滑肌动蛋白（α-SMA）、Runx2、BMP2、Wnt/β-catenin通路相关蛋白（β-catenin、GSK-3β、p-GSK-3β）及核蛋白cyclin-D1的表达情况。选择合适的PIO浓度（20μmol/L）并以PPARγ拮抗剂GW9662（20μmol/L）干预,观察以上指标的变化。结果:（1）钙化组钙离子浓度较正常对照组明显增高（P<0.05）,而不同浓度PIO均可减轻VSMC细胞外基质的钙离子浓度（P<0.05）,同时钙化组茜素红染色较正常对照...
【文章来源】：肾脏病与透析肾移植杂志. 2016,25(04)北大核心
【文章页数】：7 页
【部分图文】：
各组茜素红染色结果
图2各组细胞外基质钙盐含量的情况(分光光度法)PIO:吡格列酮;control:空白对照组;HP:钙化组;control+PIO:空白对照+20μmol/LPIO组;HP+PIO:钙化+20μmol/LPIO组;HP+PIO+GW9662:钙化+20μmol/LPIO+20μmol/LGW9662组;*与空白对照组相比，P＜0.01;＊＊与钙化组比较，P＜0.01;#与HP+PIO组相比，P＜0.01图3不同浓度的吡格列酮对大鼠VSMCα-SMA、BMP-2、Ｒunx2及β-catenin蛋白表达的影响(WesternBlot)PIO:吡格列酮;VSMC:血管平滑肌细胞;A:空白对照组;B:钙化组;C:钙化组+5μmol/LPIO;D:钙化组+10μmol/LPIO;E:钙化组+15μmol/LPIO;F:钙化组+20μmol/LPIO;*:与空白对照组相比，P＜0.05;＊＊:与钙化组比较，P＜0.01PIO对大鼠VSMC核内蛋白cyclin-D1的影响cyclin-D1是Wnt/β-catenin通路的下游靶蛋白。β-actin是细胞骨架微丝蛋白的主要成分，主要在胞浆质中表达，胞核也有较少表达。与空白对照组比较，钙化组核蛋白cyclin-D1表达显著增高;与钙化组比较，20μmol/LPIO处理组核蛋白cyclin-D1表达降低(图4)。肾脏病与透析肾移植杂志第25卷第4期2016年08月·343·
果计量资料数据采用均数±标准差表示，组间差异用单因素方差分析，P＜0.05为差异有统计学意义，P＜0.01为统计学差异显著。结果各组钙化情况茜素红染色结果显示，空白对照组细胞基质未着色，细胞呈褐色，可见细胞基质钙盐沉积染色不明显;钙化组细胞外基质呈暗红色，可见明显钙化结节，细胞仍为褐色，细胞外基质钙盐沉积染色阳性。与钙化组相比，钙化+5μmol/LPIO组及钙化+10μmol/LPIO组细胞外基质中有钙盐沉积，其程度较钙化组轻;钙化组+15μmol/LPIO及钙化组+20μmol/LPIO细胞外基质钙盐几乎无沉积，未见着色(图1)。四种不同浓度的PIO均可显著降低大鼠VSMC细胞外基质钙盐沉积染色，且DMSO对VSMC的钙化无明显影响。图1各组茜素红染色结果PIO:吡格列酮;VSMC:血管平滑肌细胞;DMSO:二甲基亚砜;A:空白对照组;B:空白对照组+25mg/mlDMSO;C:钙化组;D:钙化组+25mg/mlDMSO;E:钙化组+5μmol/LPIO;F:钙化组+10μmol/LPIO;G:钙化组+15μmol/LPIO;H:钙化组+20μmol/LPIO大鼠VSMC培养12d后，细胞外基质钙盐含量钙化组(1.751±0.036mmol/g)较空白对照组(1.321±0.196mmol/g)增高，差异有统计学意义(P＜0.001)。分别以5μmol/L、10μmol/L、15μmol/L和20μmol/LPIO干预12d后，细胞外基质钙盐含量显著低于钙化组。四种不同浓度的PIO均可显著降低大鼠VSMC外基质钙盐含量(P＜0.01)(图2A)。不同浓度PIO对α-SMA、BMP2、Ｒunx2及β-catenin蛋白表达的影响与空白对照组相比，钙化组细胞α-SMA表达量明显降低［(2.33±0.42)vs(0.96±0.44)，P＜0.01］。与钙化组相比，20μmol/LPIO干预组细胞α-SMA表达量(2.34±0.62)显著增高(P＜0.01)。钙化组BMP2、Ｒunx2及β-catenin蛋白的相对表达量，分别为(1.12±0.01)、(1.05±0.06)和(3.31±0.82)，显著
本文编号：2984605
【文章来源】：肾脏病与透析肾移植杂志. 2016,25(04)北大核心
【文章页数】：7 页
【部分图文】：
各组茜素红染色结果
图2各组细胞外基质钙盐含量的情况(分光光度法)PIO:吡格列酮;control:空白对照组;HP:钙化组;control+PIO:空白对照+20μmol/LPIO组;HP+PIO:钙化+20μmol/LPIO组;HP+PIO+GW9662:钙化+20μmol/LPIO+20μmol/LGW9662组;*与空白对照组相比，P＜0.01;＊＊与钙化组比较，P＜0.01;#与HP+PIO组相比，P＜0.01图3不同浓度的吡格列酮对大鼠VSMCα-SMA、BMP-2、Ｒunx2及β-catenin蛋白表达的影响(WesternBlot)PIO:吡格列酮;VSMC:血管平滑肌细胞;A:空白对照组;B:钙化组;C:钙化组+5μmol/LPIO;D:钙化组+10μmol/LPIO;E:钙化组+15μmol/LPIO;F:钙化组+20μmol/LPIO;*:与空白对照组相比，P＜0.05;＊＊:与钙化组比较，P＜0.01PIO对大鼠VSMC核内蛋白cyclin-D1的影响cyclin-D1是Wnt/β-catenin通路的下游靶蛋白。β-actin是细胞骨架微丝蛋白的主要成分，主要在胞浆质中表达，胞核也有较少表达。与空白对照组比较，钙化组核蛋白cyclin-D1表达显著增高;与钙化组比较，20μmol/LPIO处理组核蛋白cyclin-D1表达降低(图4)。肾脏病与透析肾移植杂志第25卷第4期2016年08月·343·
果计量资料数据采用均数±标准差表示，组间差异用单因素方差分析，P＜0.05为差异有统计学意义，P＜0.01为统计学差异显著。结果各组钙化情况茜素红染色结果显示，空白对照组细胞基质未着色，细胞呈褐色，可见细胞基质钙盐沉积染色不明显;钙化组细胞外基质呈暗红色，可见明显钙化结节，细胞仍为褐色，细胞外基质钙盐沉积染色阳性。与钙化组相比，钙化+5μmol/LPIO组及钙化+10μmol/LPIO组细胞外基质中有钙盐沉积，其程度较钙化组轻;钙化组+15μmol/LPIO及钙化组+20μmol/LPIO细胞外基质钙盐几乎无沉积，未见着色(图1)。四种不同浓度的PIO均可显著降低大鼠VSMC细胞外基质钙盐沉积染色，且DMSO对VSMC的钙化无明显影响。图1各组茜素红染色结果PIO:吡格列酮;VSMC:血管平滑肌细胞;DMSO:二甲基亚砜;A:空白对照组;B:空白对照组+25mg/mlDMSO;C:钙化组;D:钙化组+25mg/mlDMSO;E:钙化组+5μmol/LPIO;F:钙化组+10μmol/LPIO;G:钙化组+15μmol/LPIO;H:钙化组+20μmol/LPIO大鼠VSMC培养12d后，细胞外基质钙盐含量钙化组(1.751±0.036mmol/g)较空白对照组(1.321±0.196mmol/g)增高，差异有统计学意义(P＜0.001)。分别以5μmol/L、10μmol/L、15μmol/L和20μmol/LPIO干预12d后，细胞外基质钙盐含量显著低于钙化组。四种不同浓度的PIO均可显著降低大鼠VSMC外基质钙盐含量(P＜0.01)(图2A)。不同浓度PIO对α-SMA、BMP2、Ｒunx2及β-catenin蛋白表达的影响与空白对照组相比，钙化组细胞α-SMA表达量明显降低［(2.33±0.42)vs(0.96±0.44)，P＜0.01］。与钙化组相比，20μmol/LPIO干预组细胞α-SMA表达量(2.34±0.62)显著增高(P＜0.01)。钙化组BMP2、Ｒunx2及β-catenin蛋白的相对表达量，分别为(1.12±0.01)、(1.05±0.06)和(3.31±0.82)，显著
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