京尼平交联去细胞支架诱导大鼠缺损肾脏的再生

发布时间：2021-02-17 02:20

　　【目的】肾脏的再生能力几乎为零。有学者尝试用去细胞肾脏生物支架来诱导缺损肾脏的再生,已取得一定进展。但单纯去细胞生物支架有易塌陷、变形、降解快等不足之处。肾支架植入到部分肾切除大鼠体内后,支架组织降解过快,不能为组织或细胞的迁移再生提供良好的生长环境。要解决这一问题,通常需要通过交联剂来改善支架的性能,本研究拟通过京尼平交联法提高去细胞肾脏生物支架的性能,以利于组织和细胞的再生,能够为缺损肾脏的再生和修复提供更好的条件。【方法】SD大鼠90只,体重230g左右,完全随机分为正常组、未交联支架组和京尼平交联支架组。从大鼠体内结扎血管,分离肾脏,PBS经腹主动脉灌注去血后作为正常组;将离体肾脏依次灌注肝素溶液、1%TritonX-100、1%十二烷基硫酸钠（SDS）、去离子水,得到去细胞以后的肾脏生物支架,作为未交联支架组;而将制备好的去细胞生物支架浸泡在0.5%的京尼平溶液中37℃恒温箱中行化学交联12h得到京尼平交联支架组。分别用HE、Masson、免疫荧光染色观察三组肾脏的组织形态学特征;血管铸型观察三组肾脏内部脉管结构,分析支架组肾脏脉管结构的保留情况;Ⅰ型胶原酶促降解实验检测三组... 

【文章来源】：南华大学湖南省

【文章页数】：78 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

各组SD大鼠肾脏大体观

南华大学硕士学位论文16图2各组SD大鼠肾脏HE与Masson染色（10×20)，黑色箭头所指为肾小球轮廓Fig2HEandMassonstainingofSDratkidney（10×20),theblackarrowpointingtheglomerularoutline肾脏细胞外基质主要成分包括Ⅰ型胶原、Ⅳ型胶原、层粘连蛋白和纤维连接蛋白等，多种胶原纤维交织成网组成细胞外基质结构[35]。为了观察去细胞后肾支架中的细胞外基质保留情况，组织免疫荧光染色结果显示（图3），红色荧光标记为肾脏组织中Ⅰ型胶原的特异性染色，绿色荧光标记为Ⅳ型胶原的特异性抗体，蓝色为蓝染的细胞核。结果显示与正常组相比，各支架组均可见明显的Ⅰ型和Ⅳ型胶原纤维荧光染色，且经京尼平交联后的肾脏生物支架荧光染色更强，肾小球处尤为明显。除正常肾脏组以外，各支架组均未见蓝染的细胞核（图3），这一结果与上述HE及Masson染色结果一致，即正常肾脏经去细胞后能将肾脏组织中细胞核成分去除，细胞外基质成分没有受到明显的破坏，且经京尼平交联不会损坏支架中的结构。

第3章实验结果17图3各组SD大鼠肾脏胶原荧光染色（10×10），白色箭头所指为肾小球轮廓Fig3FluorescencestainingofkidneycollagenofSDratsineachgroup(10×10),thewhitearrowpointingtheglomerularoutline此外，为了检测去细胞过程对肾脏内部血管结构的损伤情况，我们对三组大鼠肾脏进行血管铸型。铸型结果（图4）显示，与正常肾脏相比，去细胞肾脏生物支架和京尼平交联支架中的血管脉络得到了很好的保留。即尽管大鼠肾脏中细胞核成分被去除，但仍保留完整的细胞外基质成分及脉管结构，这一结构的保留将有助于促进支架植入缺损肾脏后的再生。图4各组SD大鼠肾脏血管铸型Fig4RenalvascularcorrosioncastingofSDratsineachgroup

【参考文献】：
期刊论文
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[3]京尼平对ob/ob小鼠肝部分切除术后肝再生的影响[J]. 毕杨辉,崔晓萌,於海天,周子琪,尚宏伟,王稳,路欣,丁娇娇,江瑛.  中国比较医学杂志. 2018(08)
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硕士论文
[1]京尼平苷的酶解工艺及其产物的降糖活性研究[D]. 郑礼胜.中南大学 2010



本文编号：3037272