LncRNA TUG1调控前列腺癌细胞恶性生物学行为的机制研究

发布时间：2021-03-27 02:40

　　目的:长链非编码RNA（Long noncoding RNAs,lncRNAs）已经被证实可以通过调控其靶基因来调节前列腺癌（PCa）的发生发展。然而,lncRNA TUG1如何调控前列腺癌细胞的生物学行为尚不明确。本文将研究TUG1对前列腺癌细胞生物学行为的影响及其潜在分子机制。方法:培养人前列腺癌细胞系和非致瘤性人前列腺上皮细胞系,提取其总RNA,通过逆转录-定量聚合酶链反应（qRT-PCR）分析TUG1在各细胞株中的表达水平。应用小干扰RNA（siRNA）处理前列腺癌细胞,并按阴性对照组（NC）和敲低组（siTUG1）进行分组。通过伤口愈合实验、Transwell迁移/侵袭实验和CCK8法来检测敲低TUG1对前列腺癌细胞的迁移、侵袭和增殖能力的影响。生物信息学分析方法预测TUG1调控的下游靶基因。Western blotting实验分析Nrf2及其下游基因的表达水平变化,利用Oltipraz（Nrf2的一种特异性激动剂）进行“拯救试验”。结果:与非致瘤性人前列腺上皮细胞相比,前列腺癌细胞中TUG1表达明显上调。使用生物信息学工具（LncTar Web Server）来预测TUG1... 

【文章来源】：重庆医科大学重庆市

【文章页数】：42 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

qRT-PCR显示TUG1在不同细胞中的表达

重庆医科大学硕士研究生学位论文17图2.Transwell迁移、侵袭实验，伤口愈合实验检测NC组、siTUG1组、siTUG1与Oltipraz共培养组细胞的迁移、侵袭能力变化。所有试验至少进行3次，数据以平均值±标准差表示。(*:Si-TUG1vsSi-TUG1+Oltipraz,**P<0.01,*P<0.05;#:Si-NCvsSi-TUG1,##<0.01,#<0.05)Fig.2.TheinvasiveandmigratoryabilitiesofPC3cellswithdifferenttreatmentswereevaluatedbyTranswellmigration/invasionassayandquantificationofwound-healingability.Alltestswereconductedatleast3times.Dataareexpressedasmean±SD.(*:Si-TUG1vsSi-TUG1+Oltipraz,**P<0.01,*P<0.05;#:Si-NCvsSi-TUG1,##<0.01,#<0.05)2.3TUG1在前列腺癌细胞系中的表达与Nrf2呈正相关为了进一步探讨TUG1在前列腺癌中的作用机制，我们在TCGAPCaRNA-Seq数据库中进行了共表达分析(图3A和B)，发现了TUG1与Nrf2呈显著正相关(r=0.26,P=4.63E-09,n=497，图3C)。另一方面，我们使用生物信息学工具LncTar发现Nrf2通过结合核苷酸序列被预测为TUG1的靶点[33](表1)。此外，我们证实了在敲低TUG1组的PC3细胞中Nrf2的mRNA表达量也随之下调(图3D)。这些数据表明TUG1的表达与前列腺癌细胞中Nrf2的表达呈正相关。

重庆医科大学硕士研究生学位论文18图3(A和B)前50位分别与TUG1呈显著正相关和负相关的基因。(C)在TCGAPCaRNA-Seq数据库中，Nrf2表达与TUG1表达呈正相关。(D)qRT-PCR检测在PC3细胞株中NC组与转染siRNA-TUG1组Nrf2表达量变化。所有试验至少进行了3次。数据以平均值±标准差表示;**P<0.01Fig.3.(AandB)Thetop50genesthatsignificantlypositivelyandnegativelycorrelatedwithTUG1,respectively.(C)Nrf2expressionwaspositivelyassociatedwithTUG1expressionintheTCGAPCaRNA-Seqdataset.(D)Nrf2expressionlevelsinthePC3celllinetransfectedwithsi-RNA#2againstTUG1orsi-NCweredetectedbyqRT-PCR.Alltestswereundertakenatleast3times.Dataareexpressedasmean±SD;**P<0.01.表1Nrf2是lncRNATUG1的预测RNA靶点dG表示两条RNA分子之间的自由结合能力。ndG反应两条RNA内部碱基对的相对稳定性Table1Nrf2asapredictingRNAtargetoflncRNATUG1.DeltaG(dG)representstheapproximatebindingfreeenergybetweentwoRNAmolecules.Normalizedfreeenergy(ndG)reflectstherelativestabilityofinternalbasepairsinthepairedRNAs.QueryLengthTargetLengthdGndGStartPositionEndPositionStartPositionTargetEndPositionTargetTUG17542NRF2298887.890.13170922802988


本文编号：3102722