抗前列腺癌单链抗体介导的靶向siRNA抑制Notch1基因抗肿瘤实验研究

发布时间：2021-04-06 09:06

　　前列腺癌是男性发病率第二位的恶性肿瘤，我国前列腺癌发病率也逐年升高，其发病增长率已居泌尿生殖系肿瘤之首。前列腺癌具有潜伏性长、发病率高的特点。在我国70岁以上男性人群中，高达25%的人患有前列腺癌。但临床上前列腺癌早期诊断率低，因而多数患者失去了早期手术根治的机会。通过siRNA下调Notch1基因可以有效抑制人类前列腺癌细胞的生长。然而如何靶向输送siRNA进入特定细胞是临床应用此技术的主要障碍。最近有研究表明，单链抗体介导的靶向输送系统是高效下调相应基因的有效方法。为了解决RNA干扰技术在体内应用缺乏靶向性的难题，我们拟通过抗前列腺癌单链抗体的融合基因，并予以优化，进行表达、纯化后获得融合蛋白scFv-Fdt-HA2-tp（sFH-tP），构建成siRNA靶向输送系统。利用FITC-siRNA在体内外验证这一系统的有效性；随后验证靶向输送的针对Notch1基因抑制效果最佳的siRNA在体内外对前列腺癌细胞生长的抑制作用。利用这一靶向输送系统不但能克服siRNA在体内输送效率低下，还避免siRNA大量应用时所产生的“脱靶”效应、非特异性免疫反应等问题，实现对肿瘤生长的高效抑制，为RN... 

【文章来源】：中国人民解放军空军军医大学陕西省 211工程院校

【文章页数】：105 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

图12008年世界卫生组织关于全球及美国癌症的调查Fig.1Estimatednumbers(thousands)ofnewcancercases(incidence)anddeaths(mortality)

胞浆[78](图2)。绿脓杆菌外毒素分子转运结构域（280-338氨基酸）的中心功能区为螺旋结构同时也是主要转运基团[79]。图2绿脓杆菌外毒素[80]Fig.2 PseudomonasexotoxinA(PE)[80]白喉毒素（diphtheria toxin，DT）是由感染β噬菌体tox基因组的白喉杆菌所产生分子量约为58kDa的外毒素，结构为3个独立的结构域：具有毒性结构域由N端l-193氨基酸组成，转位结构域由205-375氨基酸组成，细胞膜受体结合结构域由386-535氨基酸组成[81]（图3）。完整的白喉毒素对细胞无毒性，白喉毒素与细胞膜表面的受体结合形成毒素-受体聚合物并内化入细胞形成内吞体，弗林蛋白酶的作用下在内吞体中裂解为由二硫键相连的两个亚基，分别为有核糖体依赖的酶活性大小约21kDa的包含毒性结构域

氨基酸组成[81]（图3）。完整的白喉毒素对细胞无毒性，白喉毒素与细胞膜表面的受体结合形成毒素-受体聚合物并内化入细胞形成内吞体，弗林蛋白酶的作用下在内吞体中裂解为由二硫键相连的两个亚基，分别为有核糖体依赖的酶活性大小约21kDa的包含毒性结构域，另一个由受体结合域、转运域组成大小约为37kDa。白喉毒素在

【参考文献】：
期刊论文
[1]靶向调控UPRT/5-FU自杀基因系统对前列腺癌细胞旁观者效应的研究[J]. 赵福军,李虹,曾浩,魏强,李响.  四川大学学报(医学版). 2008(03)



本文编号：3121170