STK32C在膀胱癌中作用及机制的研究

发布时间：2021-04-13 19:19

　　目的:膀胱癌是泌尿系统常见肿瘤,发病率仅次于前列腺癌。虽然膀胱癌的诊治方法在不断改善,但是高复发及进展率仍是影响临床膀胱癌治疗的重要障碍。近些年,多种生物分子被研究证实在膀胱癌的进展中起作用并与患者的预后相关。但是,目前这些分子作为生物靶点的治疗效果及生物标志物的预测作用并不理想。我们的前期实验发现,一种蛋白丝氨酸/苏氨酸激酶,STK32C的基因在TCGA数据库膀胱癌组织中呈现高表达,并猜测其可能在膀胱癌中起一定的作用。因此,本实验重点探讨了:STK32C蛋白在膀胱癌患者癌组织及癌旁的表达情况。通过体外细胞实验,探讨了STK32C对膀胱癌T24和5637细胞增殖,凋亡,侵袭和转移能力的影响。进一步,初步探究了STK32C在膀胱癌中发挥作用的可能的分子通路。方法:1.首先,收集了TCGA数据库中414例膀胱癌患者的m RNA表达数据及患者的临床信息,通过对数据进行整合分析,对STK32C基因在膀胱癌组织及癌旁的表达量进行比较。2.从临床获得膀胱癌患者术后膀胱癌及癌旁组织16例,通过免疫组化方法对组织样本的STK32C蛋白的表达量进行评定。比较STK32C在患者癌组织及癌旁中表达的差异。3... 

【文章来源】：天津医科大学天津市 211工程院校

【文章页数】：83 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

TCGA数据库分析显示，STK32C基因mRNA在膀胱癌及癌旁组织的表达情况（A）414例膀胱癌组织和19例癌旁组织中STK32C基因表达

1.2.2 人组织免疫组化揭示 STK32C 蛋白在癌及癌旁组织的表达情况从临床获取膀胱癌病人 16 例患者的术后癌及癌旁组织样本。根据病理分期，16 例患者其中包括 9 例肌层非浸润性患者（T1 期），4 例 T23 例 T3 期患者。肿瘤病理分级上，5 例为低级别，11 例为高级别。对样本进行石蜡包埋，切片，并做免疫组化分析。在显微镜下观察免疫组对于每组病人，随机在低倍镜视野下选取4个随机点，并在高倍镜下评估蛋白表达水平。典型的免疫组化图片如下所示，我们发现 STK32C 在膀常组织中表现为低表达（图 2.1.A），而在癌组织中呈现高表达（图 2对免疫组化结果量化分析显示，STK32C 蛋白在膀胱癌组织中表达量明旁正常组织（P<0.01）（图 2.2.A）。与 TCGA 数据库的分析结果一致人膀胱癌组织中证实了 STK32C 蛋白的高表达情况。根据肿瘤的病理人分组，量化结果显示，低级别膀胱癌病人 STK32C 蛋白的表达量低于胱癌患者（P<0.05）（图 2.2.B）。此外，我们发现 STK32C 蛋白表达有分期越差，表达量越高的趋势。但由于样本量较小，统计学结果并无实

图 2.2：免疫组化结果量化柱形图。（A）STK32C 蛋白在不同病理分组织及癌旁组织中表达情况量化结果。（B）不同病理级别，STK32C达情况量化结果。*P<0.05, **P<0.01。1.2.3 构建 STK32C 稳定敲低的膀胱癌 T24 和 5637 细胞系为了更好的研究 STK32C 对膀胱癌细胞功能的影响，我们通过司构建了 STK32C 敲低（shSTK32C）慢病毒载体。用携带 shSTK32照的慢病毒分别转染膀胱癌 T24 和 5637 细胞系，72h 后在荧光显微染效率。荧光显示转染率效率>80%且生长状态良好的细胞被选取，STK32C 敲低和后续的体外生物功能实验（图 3.1）。如图所示，证实染过程有较高的感染效率。


本文编号：3135865