Ang Ⅱ/AT1R介导的肾小管上皮细胞氧化应激在肾草酸钙结石形成中的作用及机制

发布时间：2021-04-15 15:24

　　第一部分草酸钙激活肾小管上皮细胞NADPH氧化酶介导的氧化应激对成石相关蛋白表达的作用研究【目的】探究NADPH氧化酶及细胞氧化应激在草酸钙诱导的肾小管上皮细胞成石相关蛋白表达中的作用及机制【方法】采用草酸钙晶体处理NRK-52E细胞,流式细胞术检测细胞内活性氧（ROS）含量（DCFH-DA探针）,检测细胞SOD、CAT、MDA含量及培养上清8-OHd G含量,共聚焦显微镜观察细胞内Ca2+信号强度,real-time PCR检测细胞AT1R表达,western blot检测细胞AT1R、NAPDH氧化酶亚基（nox2和nox4）、NF-κB通路亚基（p50和p65）和成石相关蛋白（OPN、CD44和MCP-1）表达;同时,采用NADPH氧化酶抑制剂apocynin处理细胞,观察其对上述指标的变化影响。采用腹腔注射乙醛酸法构建高草酸尿肾结石大鼠模型,Elisa法检测大鼠血清Ang Ⅱ浓度,western blot及免疫组化染色检测大鼠肾脏组织内AT1R表达。【结果】草酸钙处理诱导NRK-52E细胞内ROS产生增加,细胞SOD和CAT活性降低,而MDA及8-OHd G含量升高。weste... 

【文章来源】：华中科技大学湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

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【学位级别】：博士

【部分图文】：

-1不同浓度AngII处理对NRK-52E细胞ROS产生的影响

浓度无明显影响。本研究采取1 nM Ang II作为生理浓度Ang II，后续试验采取含 1 nM Ang II 培养基培养细胞以模拟细胞生理状态。图1-1-2 不同浓度Ang II处理对NRK-52E细胞内Ca2+浓度的影响。采用不同浓度AngII（0 nM、0.1 nM、1 nM、10 nM、100 nM、1000 nM）处理NRK-52E细胞6h，流式细胞术（Fluo-3AM探针）检测各组细胞内Ca2+浓度。当Ang II浓度达到10 nM时，细胞内Ca2+浓度明显升高，且Ca2+浓度随着Ang II浓度增加而升高；Ang II≤1 nM对细胞内Ca2+浓度无明显影响。*表示与对照组相比 < 0.05。2. 不同 CaOx 处理对 NRK-52E 细胞 ROS 产生的影响采用不同浓度（0 mM、0.1 mM、0.5 mM、1 mM、5 mM、10 mM）或不同时间（0 h、3 h、6 h、12 h、24 h、48 h）CaOx 处理 NRK-52E 细胞，流式细胞术（DCFH-

NRK-52E细胞内ROS含量与对照组相比明显升高，差异具有显著性（P<0.05）。本研究后续试验采取含 1 mM CaOx 处理 NRK-52E 细胞 6h。图1-2 不同浓度或不同时间CaOx处理对NRK-52E细胞ROS产生的影响。(a)采用不同浓度CaOx（0 mM、0.1 mM、0.5 mM、1 mM、5 mM、10 mM）处理NRK-52E细胞6h，流式细胞术检测各组细胞内ROS含量。(b)采用1 mM CaOx处理NRK-52E细胞不同时间（0 h、3 h、6 h、12 h、24 h、48 h），流式细胞术检测各组细胞内ROS含量。结果显示，当CaOx浓度达到1 mM时，NRK-52E细胞内ROS含量明显升高，且呈浓度依赖性；当CaOx处理时间达到6h时，NRK-52E细胞内ROS含量明显升高，且呈时间依赖性。*表示与对照组相比 < 0.05。3. CaOx 处理对 NRK-52E 细胞氧化还原系统的影响3.1. CaOx 处理对 NRK-52E 细胞 ROS 产生的影响NADPH 氧化酶是细胞内 ROS 的重要来源之一


本文编号：3139590