共表达IL-7和CCL19的PSMA-CAR-T细胞对前列腺癌的治疗效果的研究

发布时间：2021-05-21 15:56

　　去势抵抗性前列腺癌（CRPC）是前列腺癌经前期雄激素剥夺治疗后对雄激素非依赖型的癌症,后期发生转移的概率极高,迫切需要寻找新的创新性治疗策略。嵌合抗原受体T细胞免疫疗法（CAR-T）在治疗血液瘤中显示出显著的功效,为肿瘤治疗提供了新的可能性。但在前列腺癌这类淋巴细胞浸润程度低的冷肿瘤中效果却不理想。不同的细胞因子或趋化因子已显示出可增强T细胞的增殖、存活和肿瘤浸润等不同的功能。我们对CRPC患者来源的CD4⁺和CD8⁺T细胞进行了改造,使其在表达靶向PSMA的CAR结构的同时表达IL-7和CCL19,提高CAR-T细胞的存活和浸润能力,进而将肿瘤从“冷”变“热”,以克服目前CAR-T在CRPC治疗中存在的浸润低、增殖能力差等问题。我们设计了表达嵌合抗原受体的慢病毒载体,该载体使用2A肽序列串联三个组分,实现IL-7和CCL19与PSMA特异的CAR序列的共同表达。制备出了滴度较高的慢病毒,并通过这些慢病毒感染从病人外周血分离的CRPC-T细胞获得了阳性率在60%以上的7?19-PSMA-CAR-T细胞。研究发现7?19-PSMA-CAR-T细... 

【文章来源】：华东师范大学上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：90 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
缩略词表
第一章 前言
    1.1 前列腺癌
        1.1.1 概述
        1.1.2 前列腺癌的治疗现状
        1.1.3 mCRPC的治疗方法
    1.2 嵌合抗原受体T细胞免疫疗法
        1.2.1 概述
        1.2.2 CAR-T细胞的发展
        1.2.3 CAR-T细胞的成果与挑战
    1.3 CAR-T细胞治疗前列腺癌
        1.3.1 前列腺膜特异性膜抗原
        1.3.2 靶向PSMA的 CAR-T治疗前列腺癌的研究进展
        1.3.3 CAR-T治疗前列腺癌的困境
    1.4 IL-7和CCL19
        1.4.1 IL-7
        1.4.2 CCL9
    1.5 实验课题的目标与思路
第二章 7×19-PSMA-CAR-T细胞的体外抗肿瘤功能研究
    引言
    2.1 实验材料
        2.1.1 慢病毒质粒
        2.1.2 细胞及菌株
        2.1.3 实验试剂和耗材
        2.1.4 实验仪器
        2.1.5 实验试剂配制
    2.2 实验方法
        2.2.1 CJ-7×19 慢病毒质粒的构建
        2.2.2 慢病毒的包装和滴度的测定
        2.2.3 CAR-T细胞的制备
        2.2.4 细胞因子的检测
        2.2.5 CAR-T细胞杀伤功能的检测
        2.2.6 CAR-T细胞活化后GzmB和 IFN-γ的表达水平的检测
        2.2.7 CAR-T细胞增殖能力的检测
        2.2.8 CAR-T细胞分化能力的检测
        2.2.9 CAR-T细胞耗竭水平的检测
        2.2.10 CAR-T细胞诱导迁移能力的检测
        2.2.11 数据统计与处理
    2.3 实验结果
        2.3.1 CJ-7×19 质粒的CAR结构设计
        2.3.2 病毒滴度的检测
        2.3.3 制备的CAR-T细胞CAR表达的检测
        2.3.4 CAR-T细胞分泌IL-7和CCL19 的检测
        2.3.5 人前列腺癌细胞系的PSMA表达
        2.3.6 两种CAR-T细胞对三种靶细胞的杀伤效果
        2.3.7 7×19-PSMA-CAR-T细胞有相同细胞因子释放
        2.3.8 7×19-PSMA-CAR-T细胞具有增强的增殖能力
        2.3.9 7×19-PSMA-CAR-T细胞具有更高比例的初始记忆性T细胞
        2.3.10 7×19-PSMA-CAR-T细胞呈现出更低的耗竭表型
        2.3.11 7×19-PSMA-CAR-T细胞具有招募免疫细胞的能力
    2.4 讨论
    2.5 小结
第三章 7×19-PSMA-CAR-T细胞的体内抗肿瘤功能研究
    引言
    3.1 实验材料
        3.1.1 小鼠
        3.1.2 实验试剂和耗材
        3.1.3 实验仪器
        3.1.4 溶液的配制
    3.2 实验方法
        3.2.1 小鼠肿瘤模型
        3.2.2 小鼠的治疗
        3.2.3 肿瘤体积的记录
        3.2.4 小鼠体内指标的检测
    3.3 实验结果
        3.3.1 7×19-PSMA-CAR-T特异性杀伤PSMA+肿瘤
        3.3.2 7×19-PSMA-CAR-T细胞具有增强的肿瘤消退的能力
        3.3.3 7×19-PSMA-CAR-T细胞疗法不引起体重的降低
        3.3.4 7×19-PSMA-CAR-T细胞分泌更多的GzmB和 IFN-γ
        3.3.5 7×19-PSMA-CAR-T细胞表现出更高比例的杀伤表型
        3.3.6 7×19-PSMA-CAR-T细胞有更强的肿瘤浸润能力
    3.4 讨论
    3.5 小结
第四章 全文总结与展望
参考文献
致谢
硕士期间学术成果及科研项目


【参考文献】：
期刊论文
[1]转移性前列腺癌的临床病理特征分析[J]. 孙娟娟,高峰,许程,臧丽娟,荆翌峰,傅国辉,郭文焕.  中国男科学杂志. 2019(03)
[2]98例老年前列腺癌根治术后调强技术放疗结果分析[J]. 徐勇刚,钟秋子,高鸿,赵婷,修霞,李高峰.  中华放射肿瘤学杂志. 2019 (05)
[3]前列腺特异性抗原联合睾酮检测前列腺癌骨转移诊断效果分析[J]. 李志强,刘彦斌.  中国药物与临床. 2019(06)
[4]T细胞中的豪华轿车——CAR-T细胞[J]. 王月丹,林怡婷.  生物学通报. 2018(01)
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[7]金黄色葡萄球菌肠毒素B的原核表达、纯化及鉴定[J]. 张琨,张月娟,万一.  陕西师范大学学报(自然科学版). 2016(06)
[8]CAR-T抗肿瘤研究的现状及展望[J]. 郑敏,张岚.  山东大学学报(医学版). 2016(11)
[9]去势抵抗性前列腺癌分子信号通路的研究新进展[J]. 李曾,廖洪.  肿瘤. 2014(10)
[10]靶向免疫检查点的肿瘤免疫治疗现状与趋势[J]. 任军,黄红艳.  中国肿瘤临床. 2014(07)

硕士论文
[1]晚期前列腺癌行根治性切除术与内分泌治疗临床效果的比较[D]. 康维亭.山东大学 2017



本文编号：3199981