MicroRNA-608在人前列腺癌中的抑癌作用及其分子机制的研究

发布时间：2021-05-26 13:43

　　目的探究miR-608在前列腺癌中的功能并揭示相关的作用机制。方法（1）采用miRNA加尾法qRT-PCR测定miR-608在前列腺癌细胞系DU145和PC3以及前列腺正常细胞系RWPE-1中的表达量。采用前列腺癌组织芯片miR-608显色原位杂交的方法分析miR-608在前列腺癌组织和配对的癌旁组织中的表达情况。（2）采用BSP甲基化测序手段评估前列腺癌细胞中miR-608基因转录起始位点处的 CpG岛的甲基化状态。进一步,采用 5-氮杂-2’脱氧胞苷（5-aza-2’-deoxycytidine）DNA甲基化酶抑制剂处理前列腺癌细胞,并测定处理前后前列腺癌细胞系中miR-608的表达量。（3）Lipofectamine 2000用于在前列腺细胞系中转染miR-608 mimic。采用CCK8法细胞活性测定、细胞集落形成实验、流式细胞仪细胞周期测定、流式细胞仪细胞凋亡和活性caspase-3测定、细胞划痕愈合实验和Transwell细胞迁移实验研究miR-608在前列腺癌细胞系DU 145和PC3中的功能。另外,瘤内注射miR-608/NC mimic的PC3细胞裸鼠皮下成瘤实验被用... 

【文章来源】：浙江大学浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：147 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
致谢
中文摘要
英文摘要
绪论
    参考文献
第一章 MicroRNA-608在人前列癌细胞和组织中的表达情况及其调控机制
    1 前言
    2 材料与方法
        2.1 实验材料
        2.2 实验方法
    3 结果
        3.1 MiR-608在前列腺癌细胞系中呈现低表达
        3.2 前列腺癌组织芯片信息
        3.3 MiR-608在前列腺癌组织中呈现低表达
        3.4 MiR-608基因转录起始位点处的CpG岛甲基化状态
        3.5 甲基化酶抑制剂提升miR-608在PC3细胞系中的表达量
    4 讨论
    5 结论
    6 参考文献
第二章 MicroRNA-608对人前列腺癌细胞增殖、细胞周期、细胞凋亡和细胞迁移的影响
    1 前言
    2 材料与方法
        2.1 实验材料
        2.2 实验方法
    3 结果
        3.1 MiR-608脂质体转染前列腺癌细胞系效率评估
        3.2 MiR-608过表达抑制前列腺癌细胞生长增殖
        3.3 MiR-608过表达诱发前列腺癌细胞G2/M周期阻滞
        3.4 MiR-608过表达抑制前列腺癌细胞迁移
        3.5 MiR-608过表达诱发前列腺癌细胞凋亡
        3.6 MiR-608抑制PC3细胞裸鼠皮下成瘤
    4 讨论
    5 结论
    6 参考文献
第三章 MicroRNA-608在人前列腺癌中的作用靶点及其调控前列腺癌的相关机制
    1 前言
    2 材料与方法
        2.1 实验材料
        2.2 实验方法
    3 结果
        3.1 MiR-608靶基因作用位点数据库预测
        3.2 MiR-608过表达下调前列腺癌细胞中RAC2、PAK4、BCL2L1及其下游蛋白的表达
        3.3 RAC2和BCL2L1是miR-608的直接作用靶点
        3.4 敲低RAC2和BCL2L1可以重现过表达miR-608在前列腺癌细胞中的作用
        3.5 RAC2和BCL2L1在前列腺癌组织中呈现高表达
        3.6 RAC2/BCL2L1拯救实验
        3.7 MiR-608靶向PAK4的编码区
        3.8 敲低PAK4可以重现过表达miR-608在前列腺癌细胞中的作用
        3.9 PAK4拯救实验
    4 讨论
    5 结论
    6 参考文献
综述
    参考文献
作者简历及在读期间取得的科研成果


【参考文献】：
期刊论文
[1]miRNA的生物合成过程[J]. 李伟,金由辛.  生物化学与生物物理进展. 2005(08)



本文编号：3206469