骨化三醇抑制晚期前列腺癌作用机制研究

发布时间：2021-05-28 09:01

　　目的:通过不同浓度的骨化三醇在不同时间点体外干预DU145及PC-3细胞,评价其对两种前列腺癌细胞增殖及死亡效应的影响,进一步探讨其作用机制。希望通过合理的联合用药,优化骨化三醇的抗肿瘤效应。为临床治疗晚期前列腺癌提供新的思路和理论支持,促进临床转化。方法:选择DU145及PC-3细胞。体外扩增至足够数量。对两种前列腺癌细胞实施不同浓度骨化三醇干预。在不同的时间点通过CCK-8检测细胞增殖率,台盼兰染色计算细胞总死亡率,PI染色分析细胞周期分布,Annexin V流式细胞仪检测早期凋亡。通过westernblot技术,分析两种细胞凋亡和自噬信号通路的激活的状况。进一步通过氯喹阻断PC-3自噬信号通路,明确其是否有增敏骨化三醇的抗肿瘤效应。结果:骨化三醇体外干预72小时内,促进DU145细胞增殖,抑制凋亡,对自噬信号通路无明显影响。骨化三醇抑制PC-3细胞增殖,促进自噬,对凋亡信号通路无明显影响。骨化三醇联合氯喹较单独应用骨化三醇或氯喹能更好的抑制PC-3细胞的增殖,并促进其通过自噬上游激活同时自噬下游抑制来提高细胞死亡率。结论:骨化三醇通过促进增殖、抑制凋亡,促进DU145细胞进展。骨... 

【文章来源】：上海交通大学上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：106 页

【学位级别】：博士

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绪论
第一部分 骨化三醇对DU145、PC-3 细胞生存及死亡的功能学研究
    1 主要实验材料与设备
        1.1 实验材料
        1.2 实验设备
    2 实验方法
        2.1 体外细胞培养、冻存、复苏
        2.2 细胞增殖率检测
        2.3 细胞死亡率检测
        2.4 细胞周期检测
        2.5 细胞早期凋亡检测（Annexin V/PI）
        2.6 统计学方法
    3 实验结果
        3.1 细胞形态学评估
        3.2 细胞增殖率检测结果
        3.3 细胞死亡率检测结果
        3.4 细胞周期检测结果
        3.5 细胞早期凋亡检测结果
    4 第一部分讨论
第二部分 骨化三醇通过凋亡及自噬信号通路的调控影响细胞生存及死亡的机制研究
    1 主要实验材料和设备
        1.1 实验材料
        1.2 实验设备
    2 实验方法
        2.1 人前列腺癌标本免疫组化染色
        2.2 PC-3 细胞免疫荧光检测
        2.3 凋亡及自噬信号通路分子检测
        2.4 骨化三醇联合氯喹通过自噬通路调节促进PC-3 细胞死亡的分子机制
        2.5 骨化三醇联合氯喹干预对PC-3 细胞增殖及总死亡率的影响
        2.6 统计学方法
    3 实验结果
        3.1 人体标本免疫组化染色结果
        3.2 PC-3 细胞免疫荧光检测结果
        3.3 凋亡及自噬信号通路分子western检测结果
        3.4 骨化三醇联合氯喹作用后自噬通路分子western检测结果
        3.5 骨化三醇联合氯喹干预PC-3 细胞后增殖及总死亡率的检测结果
    4 第二部分讨论
全文小结
结论
参考文献
致谢
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本文编号：3207964