调控Foxo1表达以重塑七氟醚对糖尿病肾缺血再灌注保护效应
发布时间：2021-06-02 16:57
目的:随着糖尿病患病率逐年上升,糖尿病患者的缺血再灌注易感性引起了广泛重视。临床上常用的以吸入性麻醉药预处理减少手术中缺血再灌注损伤的策略对于糖尿病患者是否仍旧适用值得进一步研究。本研究的目的在于探究吸入性麻醉药七氟醚对糖尿病肾缺血再灌注损伤的效应及内在机制,以及Foxo1抑制剂AS1842856对七氟醚糖尿病肾缺血再灌注保护效应的影响。方法:1.正常C57小鼠分为3组,每组10只,分别给予假手术、肾缺血再灌注和七氟醚预处理肾缺血再灌注处理,观察各组小鼠血糖、血肌酐、尿素氮变化情况及病理切片Pas染色镜下形态结果。2.C57小鼠连续注射5天链脲佐菌素,建立1型糖尿病小鼠模型。将糖尿病小鼠分为3组,每组10只,分别给予假手术、肾缺血再灌注和七氟醚预处理肾缺血再灌注处理。观察不同组小鼠血糖、血肌酐、尿素氮水平变化情况及病理切片Pas染色损伤结果。3.糖尿病七氟醚预处理肾缺血再灌注组中,在七氟醚预处理前,AS1842568糖尿病肾缺血再灌注七氟醚预处理组（D+I+AS组）小鼠给予Foxo1抑制剂AS1842856处理,其他组小鼠给予等量甲基纤维素。观察抑制剂预处理组小鼠血糖、血肌酐、尿素氮变...
【文章来源】：山西医科大学山西省
【文章页数】：58 页
【学位级别】：硕士
【图文】：
各组PAS损伤分数Fig3HistogramofPASdamagescore与W+S组比较vsW+Sgroup，*P<0.05；与W+I组比较vsW+Igroup，#P<0.05；与D+S组比
山西医科大学（博）硕士学位论文19表达上调（P<0.01），具有统计学意义。然而与D+I组相比，D+I+S组以上因子mRNA表达水平变化差异无统计学意义（图6，7，8）。进一步验证了上述结果。虽然七氟醚可调控PI3K/Akt信号通路发挥肾缺血再灌注保护效应，但是合并糖尿病时七氟醚保护效应消失并且可能与无法调控PI3K/Akt信号有关。2.2AS1842856抑制Foxo1下游基因表达重塑七氟醚保护效应AS1842856是Foxo1靶向抑制剂，可以与去磷酸化的活性Foxo1结合，特异性地抑制Foxo1的反向激活，但是并不与非活性的p-Foxo1发生结合。结合后AS1842856会抑制Foxo1下游转录因子的表达水平，但是不会响Foxo1mRNA的表达。本研究中将AS1840856溶于6%甲基纤维素中，以70mg/KG浓度预处理小鼠，之后再给予七氟醚预处理及肾缺血再灌注处理，观察AS1842856对七氟醚预处理糖尿病肾缺血再灌注保护效应的影响。实验结果发现，与D+I组相比，D+I+AS组饮食、饮水、血糖水平无差异，血肌酐（P<0.01）、尿素氮（P<0.05）表达减少，病理切片PAS染色损伤分数下降（P<0.01），具有统计学意义（图1-3，表1，2）；p-Akt、p-Foxo1蛋白表达升高（P<0.01），Foxo1蛋白及mRNA表达未见有差异（P>0.05），Caspase-3蛋白表达降低（P<0.01）；Akt、Pdx1mRNA表达升高（P<0.01），Caspase-3及Foxo1下游基因Bim、Fas、G6Pase、PEPCK、MafA和NeuroDmRNA表达下调（P<0.01），具有图5四组小鼠p-Akt、Foxo1、p-Foxo1、Caspase-3蛋白表达含量比较Fig5TheProteinexpressionofp-Akt、Foxo1、p-Foxo1、Caspase-3infourgroups与D+S组比较vsD+Sgroup，*P<0.05；与D+I组比较vsD+Igroup，#P<0.05;与D+I+S组比较vsD+I+Sgroup，△P<0.05。
山西医科大学（博）硕士学位论文218）。由此可见通过给予AS1842856预处理与去磷酸化Foxo1结合后，阻断其与下游基因的结合过程，从而发挥减少凋亡、促进血糖代谢及维持β细胞稳定的作用，可以重塑七氟醚糖尿病肾缺血再灌注保护效应。图7实时荧光定量各组基因扩增曲线Fig7Real-timefluorescencequantificationofgeneamplificationcurvesofeachgroup1，2，3，4分别为D+S组，D+I组，D+I+S组，D+I+AS组；A为各组PEPCK荧光强度，B为MafA荧光强度，C为NeuroD荧光强度，D为Pdx1荧光强度
【参考文献】：
期刊论文
[1]通心络对活化血小板诱导人脐静脉内皮细胞的保护作用[J]. 刘红利,位庚,李红蓉,陈檬,王宏涛. 中成药. 2016(09)
[2]高脂饮食对慢性低氧大鼠肺组织eNOS/NO的影响[J]. 赵艳霞,李玉红,王亚平,杨应忠,马兰,格日力. 中国应用生理学杂志. 2014(04)
[3]黄芪对游离脂肪酸致血管内皮细胞功能损伤的保护作用[J]. 王意君,余叶蓉. 四川大学学报(医学版). 2011(01)
[4]Contribution of oxidative stress to pulmonary arterial hypertension[J]. Vincent G DeMarco,Adam T Whaley-Connell,James R Sowers,Javad Habibi,Kevin C Dellsperger. World Journal of Cardiology. 2010(10)
本文编号：3210406
【文章来源】：山西医科大学山西省
【文章页数】：58 页
【学位级别】：硕士
【图文】：
各组PAS损伤分数Fig3HistogramofPASdamagescore与W+S组比较vsW+Sgroup，*P<0.05；与W+I组比较vsW+Igroup，#P<0.05；与D+S组比
山西医科大学（博）硕士学位论文19表达上调（P<0.01），具有统计学意义。然而与D+I组相比，D+I+S组以上因子mRNA表达水平变化差异无统计学意义（图6，7，8）。进一步验证了上述结果。虽然七氟醚可调控PI3K/Akt信号通路发挥肾缺血再灌注保护效应，但是合并糖尿病时七氟醚保护效应消失并且可能与无法调控PI3K/Akt信号有关。2.2AS1842856抑制Foxo1下游基因表达重塑七氟醚保护效应AS1842856是Foxo1靶向抑制剂，可以与去磷酸化的活性Foxo1结合，特异性地抑制Foxo1的反向激活，但是并不与非活性的p-Foxo1发生结合。结合后AS1842856会抑制Foxo1下游转录因子的表达水平，但是不会响Foxo1mRNA的表达。本研究中将AS1840856溶于6%甲基纤维素中，以70mg/KG浓度预处理小鼠，之后再给予七氟醚预处理及肾缺血再灌注处理，观察AS1842856对七氟醚预处理糖尿病肾缺血再灌注保护效应的影响。实验结果发现，与D+I组相比，D+I+AS组饮食、饮水、血糖水平无差异，血肌酐（P<0.01）、尿素氮（P<0.05）表达减少，病理切片PAS染色损伤分数下降（P<0.01），具有统计学意义（图1-3，表1，2）；p-Akt、p-Foxo1蛋白表达升高（P<0.01），Foxo1蛋白及mRNA表达未见有差异（P>0.05），Caspase-3蛋白表达降低（P<0.01）；Akt、Pdx1mRNA表达升高（P<0.01），Caspase-3及Foxo1下游基因Bim、Fas、G6Pase、PEPCK、MafA和NeuroDmRNA表达下调（P<0.01），具有图5四组小鼠p-Akt、Foxo1、p-Foxo1、Caspase-3蛋白表达含量比较Fig5TheProteinexpressionofp-Akt、Foxo1、p-Foxo1、Caspase-3infourgroups与D+S组比较vsD+Sgroup，*P<0.05；与D+I组比较vsD+Igroup，#P<0.05;与D+I+S组比较vsD+I+Sgroup，△P<0.05。
山西医科大学（博）硕士学位论文218）。由此可见通过给予AS1842856预处理与去磷酸化Foxo1结合后，阻断其与下游基因的结合过程，从而发挥减少凋亡、促进血糖代谢及维持β细胞稳定的作用，可以重塑七氟醚糖尿病肾缺血再灌注保护效应。图7实时荧光定量各组基因扩增曲线Fig7Real-timefluorescencequantificationofgeneamplificationcurvesofeachgroup1，2，3，4分别为D+S组，D+I组，D+I+S组，D+I+AS组；A为各组PEPCK荧光强度，B为MafA荧光强度，C为NeuroD荧光强度，D为Pdx1荧光强度
【参考文献】：
期刊论文
[1]通心络对活化血小板诱导人脐静脉内皮细胞的保护作用[J]. 刘红利,位庚,李红蓉,陈檬,王宏涛. 中成药. 2016(09)
[2]高脂饮食对慢性低氧大鼠肺组织eNOS/NO的影响[J]. 赵艳霞,李玉红,王亚平,杨应忠,马兰,格日力. 中国应用生理学杂志. 2014(04)
[3]黄芪对游离脂肪酸致血管内皮细胞功能损伤的保护作用[J]. 王意君,余叶蓉. 四川大学学报(医学版). 2011(01)
[4]Contribution of oxidative stress to pulmonary arterial hypertension[J]. Vincent G DeMarco,Adam T Whaley-Connell,James R Sowers,Javad Habibi,Kevin C Dellsperger. World Journal of Cardiology. 2010(10)
本文编号：3210406
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