抗前列腺癌双特异性抗体的构建、表达、纯化及其活性鉴定的实验研究

发布时间：2021-06-11 10:40

　　目的：1.构建双特异性双链抗体BsDb（抗-PSMA×抗-FITC）的基因序列及质粒载体pET-28（a）-BsDb，将其转入大肠杆菌中构成BsDb的原核表达体系，以IPTG诱导表达并纯化。2.培养人前列腺癌细胞系，检测PSMA表达情况及鉴定双特异性抗体BsDb的活性。方法：1.通过对本课题组先期测得的抗-PSMA单链抗体（ScFv-P）与抗-FITC单链抗体（ScFv-F）基因序列的分析，获得两条ScFv各自的重链和轻链序列。通过VectorNTI9软件将ScFv-P的重链（PVH）和轻链（PVL）与ScFv-F的轻重链（FVL和FVH）交叉连接，构成PVH-Linker-FVL和PVL-Linker-FVH两条杂合链，将其连接后以全基因合成的方法合成BsDb的基因片段。在其C端设计一个XbaⅠ酶切位点，N端设计一个XhoⅠ酶切位点。将BsDb基因片段用XbaⅠ与XhoⅠ两个限制性内切酶进行双酶切并与经过同样双酶切的pET-28（a）质粒载体用T4连接酶连接成pET-28（a）-BsDb，将其转入大肠杆菌BL21，以IPTG诱导其表达，对表达产物用镍亲和层析柱进行纯化。2.培养人前列... 

【文章来源】：中国人民解放军空军军医大学陕西省 211工程院校

【文章页数】：66 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

质粒载体双酶切后电泳图

图 3：质粒载体双酶切后电泳图 Mark，1、2 为酶切后结果，3 为酶切性表达，本组实验从两个方面对诱导表达结果见图（4），可见诱导后目的对于其他三种浓度稍微少些，综合选择 0.50‰为 IPTG 诱导浓度。

第四军医大学硕士学位论文间的诱导，检测目的蛋白在上清中可h 结果见图（5），诱导后目的蛋白表达清中并未见明显的目的条带；16℃的蛋白表达，可见上清和沉淀中均有 结果见图（7），结果与 12h 相似。性表达。鉴于 16℃、220rpm/min 条条件为：16℃、150rpm/min 条件下诱

【参考文献】：
期刊论文
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[3]FITC-抗FITC系统在夹心法ELISA检测IFN-γ和IL-4中的应用[J]. 庄然,李琦,刘雪松,欧阳为明,韩卫宁,王薇,金伯泉.  中国免疫学杂志. 2004(09)



本文编号：3224379