NCOA5在肾癌中的基础与临床研究

发布时间：2017-04-24 02:02

  本文关键词：NCOA5在肾癌中的基础与临床研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:检测肾上皮细胞株293、HK2,肾癌细胞株ACHN、OS-RC-2,以及肾癌组织中NCOA5的表达,分析NCOA5与肾癌患者临床特点之间的关系;建立高表达NCOA5的肾癌稳定株细胞,研究NCOA5对细胞增殖、迁移及侵袭的影响。方法:(1)用Western blot检测肾上皮细胞株293、HK2,肾癌细胞株ACHN、OS-RC-2中NCOA5的表达,统计分析肾上皮细胞与肾癌细胞中NCOA5表达的差异。(2)用免疫组化检测临床肾癌组织标本中NCOA5的表达,统计分析NCOA5表达与临床特点之间的关系。(3)通过含有NCOA5基因的慢病毒及空载体慢病毒感染肾癌细胞ACHN和OS-RC-2,流式细胞仪分选并建立高表达NCOA5的肾癌稳定株。(4)用Western blot检测转染NCOA5基因前后,肾癌细胞株中NCOA5蛋白的表达,统计分析是否有差异。(5)用CCK-8法、细胞划痕及Transwell实验分别检测转染NCOA5对肾癌细胞的生长增殖、细胞侵袭及迁移等影响。结果:(1)Western blot结果显示293、HK2、ACHN、OS-RC-2细胞中NCOA5的相对表达量分别为0.52±0.02、0.34±0.01、0.11±0.02、0.04±0.02,293细胞株中NCOA5的表达量最高,OS-RC-2中NCOA5表达量最低,而肾癌细胞株中NCOA5的表达水平低于肾上皮细胞中的表达。(2)免疫组化结果显示14例肾癌病例中NCOA5阳性表达9例,阳性率为64.3%,癌旁组织中NCOA5均为阳性表达(x2=6.087、P=0.0410.05),表明NCOA5在肾癌中的表达低于癌旁组织。分析显示肾癌组织中NCOA5的表达高低还与患者年龄、肿瘤最大直径、有无淋巴结转移、临床分期情况、核分化等级显著相关(x2=7.778、10.370、5.833、5.833、7.778,p=0.021、0.003、0.031、0.031、0.021均0.05)。而与患者性别、病理类型、肿瘤部位无显著相关(x2=4.321、2.121、0.026,p=0.086、0.258、1.000均0.05)。在年龄大、肿瘤直径大、有淋巴结转移、高临床分期、高的核分化等级的病例中,NCOA5的表达相对较低。(3)转染NCOA5后ACHN、OS-RC-2细胞传代时间延长,并导致大量细胞死亡;而空载体慢病毒转染后传代时间无明显变化,未出现大量细胞死亡。在换用更高培养条件的DMEM培养基后,并经大量细胞流式分选,最终建立了高表达NCOA5的ACHN肾癌稳定株,OS-RC-2细胞因转染NCOA5后大量细胞死亡,未能建立相应的稳定株。(4)Western Blot检测显示ACHN、NC-ACHN、NCOA5-ACHN细胞中NCOA5的相对表达量分别为0.13±0.06、0.16±0.01、0.81±0.03。NCOA5-ACHN组中NCOA5表达含量相对高于ACHN、NC-ACHN组中NCOA5表达含量(P0.05)。(5)CCK-8实验检测得到ACHN、NC-ACHN、NCOA5-ACHN组与对照组吸光度的差值,在24 h分别为0.32±0.04、0.31±0.03、0.21±0.02;48 h分别为0.54±0.10、0.58±0.07、0.34±0.03;72 h分别为1.10±0.14、1.04±0.11、0.63±0.16;与ACHN组相比较,NCOA5-ACHN组细胞的增殖能力明显减弱(P0.05),NC-ACHN组无明显变化(P0.05),表明过表达NCOA5后细胞增殖能力下降(P0.05)。(6)细胞划痕实验24小时ACHN、NC-ACHN、NCOA5-ACHN各组细胞边界间距离变化分别为:0.820±0.017、0.785±0.031、0.482±0.015,经检验ACHN、NC-ACHN组之间无统计学差异(P0.05),NCOA5-ACHN组与其它两组均有统计学差异(P0.05),NCOA5-ACHN组细胞迁移的细胞数量明显降低。(7)利用Transwell侵袭实验显示ACHN、NC-ACHN、NCOA5-ACHN组穿膜细胞数分别是410±14、418±16、107±9,经分析ACHN、NC-ACHN组穿膜细胞数无统计学差异(P0.05),而NCOA5-ACHN组穿膜细胞数与其它两组均有显著的统计学差异(P0.05),可见在肾癌细胞株ACHN过表达NCOA5后细胞的侵袭力明显降低。结论:(1)本实验通过Western blot检测证明NCOA5在人肾上皮细胞293、HK2中的表达要明显高于人肾癌细胞ACHN、OS-RC-2,且不同的上皮细胞和肾癌细胞之间的表达量均存在差异。(2)免疫组化分析人肾癌组织中NCOA5的相对表达比癌旁组织要低,且NCOA5的表达量与与患者年龄、肿瘤大小、淋巴结转移状况、临床分期、核分化等级有关。(3)本实验通过慢病毒感染NCOA5基因,建立了稳定表达NCOA5的ACHN细胞株,成功提高了ACHN中NCOA5的表达。(4)高表达NCOA5可抑制肾癌细胞株ACHN的增殖、迁移与侵袭力。
【关键词】：肾癌 NCOA5 Western Blot 免疫组化 慢病毒 过表达 CCK-8 细胞划痕试验 Transwell
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.11
【目录】：

• 中文摘要4-7
• Abstract7-11
• 引言11-14
• 第一部分 检测肾癌细胞株及肾癌组织中NCOA5 的表达及其临床意义14-32
• 实验材料和设备14-17
• 实验方法与步骤17-24
• 实验结果24-30
• 讨论30-32
• 第二部分 NCOA5 对肾癌细胞株的增殖、侵袭、转移等方面的影响32-52
• 实验材料和设备32-35
• 实验方法与步骤35-43
• 实验结果43-48
• 讨论48-52
• 结论52-53
• 参考文献53-56
• 综述56-64
• 参考文献60-64
• 攻读学位期间发表的论文64-65
• 中英文对照缩略词表65-67
• 致谢67-68

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本文编号：323362