Angiopoietin-1对糖尿病大鼠肾脏缺氧状态及其微血管渗漏性的影响
本文关键词：Angiopoietin-1对糖尿病大鼠肾脏缺氧状态及其微血管渗漏性的影响，由笔耕文化传播整理发布。
【摘要】：目的:构建糖尿病肾病大鼠模型,给予Angiopoietin-1(Ang-1)腺病毒表达载体并活体静脉注射伊文思蓝(EB),观察肾脏缺氧相关指标以及EB含量变化,评估Ang-1对肾脏缺氧状态及其微血管渗漏性的影响。方法:构建并鉴定高效表达Ang-1腺病毒载体(Ad-Ang-1)。使用链脲菌素(STZ)腹腔注射诱导构建SD大鼠糖尿病模型。设正常对照组(NC)、糖尿病组(DN)、糖尿病Ang-1干预组(AV)及糖尿病空腺病毒组(BV)。AV组成模8周后经阴茎静脉注射Ad-Ang-1(3×108 pfu/只)。分别于12周末、16周末处死大鼠,采集血、尿标本,比较各组间血糖、肌酐、尿素、胰岛素、胰高血糖素、生长激素、甲状腺素水平及尿肾损伤因子1(KIM-1)和24小时尿蛋白的变化;留取肾组织标本,常规染色观察肾脏病理,缺氧探针观察肾脏缺氧状况,免疫组化及荧光、免疫印迹(WB)测定肾组织中低氧诱导因子-1α(HIF-1α)、血红素加氧酶-1(HO-1)、脯氨酸羟化酶2(PHD2)的蛋白水平,实时荧光定量聚合酶链反应(Real-Time PCR)方法测定肾组织中HIF-1α、HO-1、PHD2的m RNA水平;通过伊文思蓝(EB)活体静脉注入,取肾组织均浆,分光度计检测其含量。结果:1.主要血、尿指标:1三个糖尿病模型组血糖、24小时尿蛋白均明显高于NC组(P0.01),但各模型组间无明显差异(P0.05)。2各组大鼠组间血肌酐水平无明显差异(P0.05),但AV、BV组16w高于12w(P0.05);AV组血尿素水平高于NC、DN组(P0.05)。3NC组血胰岛素水平高于三个模型组,但仅与DN组12w时存在统计学差异(P0.05);各组血胰高血糖素、生长激素水平无明显差异(P0.05);BV组12w时甲状腺素水平明显高于其他三个组(P0.01)。4三个糖尿病模型组尿KIM-1水平均明显升高,且AV组显著高于DN、BV组(P0.01),DN组16w时明显高于12w(P0.05)。2.肾脏病理:模型组大鼠肾脏明显肿大、发白,且肾重指数显著高于NC组(P0.01),可见不同程度的肾小球增大、系膜基质增多、细胞数增多、部分肾小管扩张、颗粒和空泡变性,AV组病理改变相对减轻。3.缺氧探针免疫组化:NC组主要着染于内髓及皮髓交界区,而模型组阳性染色范围扩大至皮质区,其中AV组肾脏缺氧探针阳性染色面积明显低于DN、BV组(P0.01)。4.缺氧反应相关指标免疫组化/荧光及WB:1HIF-1α突出表达于肾小管、肾小球细胞核及部分肾小管胞浆,三个糖尿病模型组肾组织表达较NC组均明显上调(P㩳0.01),其中AV组上调显著高于DN、BV组(P㩳0.05),且16w较12w下调(P㩳0.05)。2HO-1主要表达于肾小管上皮细胞胞浆,三个糖尿病模型组肾组织表达较NC组均明显上调(P㩳0.05),其中AV组上调显著高于DN、BV组(P㩳0.05),16w较12w下调(P㩳0.05)。3PHD2主要表达于肾小管上皮细胞胞浆,DN、BV组表达较NC组均明显上调(P㩳0.01),AV组显著低于DN、BV组(P㩳0.01)。5.缺氧反应相关指标Real-Time PCR:1三个糖尿病模型组肾组织HIF-1αm RNA表达均较NC组升高,但仅AV组存在明显统计学差异(P㩳0.05),16w时AV组显著高于DN、BV组(P㩳0.05)。2三个糖尿病模型组肾组织HO-1 m RNA表达均较NC组升高,但仅AV组16w时有明显学差异(P㩳0.05)。3三个糖尿病模型组肾组织PHD2 m RNA表达均较NC组升高,但仅DN、BV组有明显差异(P㩳0.05),12w时AV组明显低于DN组(P㩳0.05)。6.肾脏微血管渗漏性:EB灌注后,NC组于肾盂、肾盏处可见明显蓝染,三个模型组皮质和髓质区域均被广泛蓝染,但AV组蓝染程度较DN、BV组减轻;三个糖尿病模型组肾组织中EB含量均高于NC组,其中DN、BV组升高明显(P㩳0.05),而AV组明显低于DN、BV组(P㩳0.05)。结论:1.糖尿病大鼠肾脏存在慢性缺氧,Ang-1可改善糖尿病大鼠肾脏缺氧状态;2.Ang-1改善糖尿病大鼠肾脏缺氧状态可能与上调HIF-1α及HO-1表达,抑制PHD2表达相关;3.Ang-1可改善糖尿病大鼠肾脏微血管渗漏性;4.Ang-1对糖尿病大鼠血胰岛素、胰高血糖素、生长激素、甲状腺素水平影响不明显。
【关键词】：糖尿病肾脏疾病 缺氧 促血管生成素-1 低氧诱导因子-1α 血管渗漏性
【学位授予单位】：遵义医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R587.2;R692.9
【目录】：
- 中英文缩略词表4-5
- 中文摘要5-7
- 英文摘要7-10
- 前言10-12
- 材料与方法12-24
- 结果24-54
- 讨论54-59
- 结论59-60
- 参考文献60-65
- 综述65-72
- 参考文献69-72
- 致谢72-73
- 作者简介73
【参考文献】
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