SB431542对高糖环境中小鼠足细胞Cdk5/p35表达的影响
发布时间：2021-07-15 08:21
目的应用SB431542及Roscovitine处理高糖培养的足细胞,观察抑制转化生长因子（TGF）-β1通路对高糖培养足细胞中Cdk5/p35表达的影响及抑制Cdk5激酶活性对高糖和TGF-β1诱导足细胞凋亡的影响。方法采用不同浓度SB431542（0.1,1.0,10μmol/L）处理高糖培养的足细胞,Western印迹法及RT-PCR技术检测各处理组Cdk5及p35蛋白和mRNA的表达变化情况。应用流式细胞术检测Roscovitine对高糖及TGF-β1刺激足细胞凋亡的影响。结果高糖（HG组）Cdk5和p35的蛋白及mRNA表达水平明显增高,显著高于正常血糖组（NG）组和甘露醇组（M组）（P<0.05）,并且呈时间依赖性升高。加入SB431542后,高糖培养导致的足细胞内Smad-2蛋白磷酸化水平明显降低。同时,HG+SB431542组足细胞内Cdk5和p35的蛋白及mRNA表达水平呈浓度依赖性显著降低,明显低于HG组（P<0.05）。加入Roscovitine后,高糖及TGF-β1诱导足细胞的足细胞凋亡水平显著下降（P<0.05）。结论高糖可能通过活化TGF-...
【文章来源】：中国老年学杂志. 2016,36(08)北大核心CSCD
【文章页数】：4 页
【部分图文】：
Western印迹法检测各组足细胞中Cdk5/p35蛋白的表达
.03±1.59)%〕，明显高于NG组〔(5.53±0.81)%，P＜0.05〕，而应用Ｒoscovitine后，HG+ＲOS组和TGF-β1+ＲOS组足细胞的凋亡率出现降低〔(14.65±1.57)%和(17.24±1.05)%〕，显著低于高糖和TGF-β1培养的细胞(P＜0.05)。见表3～表5。表2SB431542对高糖刺激足细胞中Cdk5/p35蛋白表达的影响(n=3，OD值，x±s)组别Cdk5p35NG组0．24±0．050．23±0．13HG3h组0．61±0．241)0．56±0．061)HG6h组0．88±0．221)0．77±0．181)HG12h组1．14±0．161)1．09±0．111)与NG组比较:1)P＜0．05，表3同图2Western印迹检测不同浓度SB431542处理高糖培养足细胞后Cdk5/p35蛋白的表达表3Cdk5/p35mＲNA在各组足细胞中的表达(n=3，x±s)组别Cdk5p35NG组1．00±0．231．00±0．11HG3h组2．12±0．251)4．56±0．541)HG6h组5．79±0．581)7．33±1．061)HG12h组9．66±0．931)12．7±1．371)表4Cdk5/p35、p-Smad-2蛋白在各组足细胞中的表达(n=3，OD值，x±s)组别Cdk5p35p-Smad-2NG组0．43±0．080．27±0．060．21±0．08HG组0．83±0．110．71±0．050．62±0．03HG+SB431542(0．1μmol/L)组0．49±0．081)2)0．41±0．081)2)0．37±0．111)2)HG+SB431542(1．0μmol/L)组0．34±0．071)2)0．21±0．041)2)0．16±0．061)2)HG+SB431542(10μmol/L)组0．11±0．051)2)0．07±0．031)2)0．04±0．021)2)与NG组比较:1)P＜0．05;与HG组比较:2)P＜0．05，下表同·1796·中国老年学杂志2016年4月第36卷
样缓冲液，500μl/管(按1∶4用MilliQ水/灭菌蒸馏水稀释)，反复吹打均匀;分别加入5μlFITC标记的AnnexinV和5μlPI，混匀后避光室温孵育10min，立即上流式细胞仪检测结果。1.3统计学方法采用SPSS13.0软件行方差分析。2结果2.1高糖对足细胞中Cdk5/p35表达的影响Western印迹法检测结果显示，HG组足细胞内Cdk5和p35的蛋白表达水平在高糖培养后有显著增高，明显高于NG组和M组(P＜0.05，图1)，并且随高糖培养时间的延长逐渐增高(图1)。ＲT-PCＲ检测结果显示，Cdk5和p35的mＲNA表达水平在HG组呈时间依赖性显著升高(表1)。图1Western印迹法检测各组足细胞中Cdk5/p35蛋白的表达表1高糖对足细胞中Cdk5/p35蛋白表达的影响(n=3，OD值，x±s)组别Cdk5p35NG组0．27±0．020．25±0．03M组0．24±0．030．23±0．05HG组1．28±0．191)2)1．12±0．141)2)与NG组比较:1)P＜0．05;与M组比较:2)P＜0．052.2SB431542对高糖刺激足细胞中Cdk5/p35表达的影响Western印迹检测结果显示，应用SB431542后，HG+SB431542组足细胞中phospho-Smad-2蛋白表达水平显著降低(图2)，提示高糖刺激引起的TGF-β1通路活化被抑制。应用SB431542后，HG+SB431542组足细胞中Cdk5和p35的蛋白表达水平有明显降低，显著低于NG组和HG组(P＜0.05)，并与SB431542的浓度密切相关，呈浓度依赖性降低，10μmol/LSB431542的抑制效果最显著(图2)。定量PCＲ的检测结果显示，HG+SB431542组足细胞内Cdk5和p35的mＲNA表达水平同SB431542的浓度密切相关，呈浓度依赖性降低，显著低于NG组和HG组(P＜0.05，表2)。2.3抑制Cdk5激酶活性对高糖及TGF-β1刺激足细胞凋亡的影响高糖和TGF-β1培养足细胞后，细胞凋亡率显著升高〔(20.01±1.72)%和(22.03±1.59)%〕，明显高于NG组〔(5.5
【参考文献】：
期刊论文
[1]Cdk5抑制剂Roscovitine对糖尿病大鼠肾功能及nestin表达的影响[J]. 张悦,周毅,张怡,刘巍. 中国药理学通报. 2013(08)
本文编号：3285350
【文章来源】：中国老年学杂志. 2016,36(08)北大核心CSCD
【文章页数】：4 页
【部分图文】：
Western印迹法检测各组足细胞中Cdk5/p35蛋白的表达
.03±1.59)%〕，明显高于NG组〔(5.53±0.81)%，P＜0.05〕，而应用Ｒoscovitine后，HG+ＲOS组和TGF-β1+ＲOS组足细胞的凋亡率出现降低〔(14.65±1.57)%和(17.24±1.05)%〕，显著低于高糖和TGF-β1培养的细胞(P＜0.05)。见表3～表5。表2SB431542对高糖刺激足细胞中Cdk5/p35蛋白表达的影响(n=3，OD值，x±s)组别Cdk5p35NG组0．24±0．050．23±0．13HG3h组0．61±0．241)0．56±0．061)HG6h组0．88±0．221)0．77±0．181)HG12h组1．14±0．161)1．09±0．111)与NG组比较:1)P＜0．05，表3同图2Western印迹检测不同浓度SB431542处理高糖培养足细胞后Cdk5/p35蛋白的表达表3Cdk5/p35mＲNA在各组足细胞中的表达(n=3，x±s)组别Cdk5p35NG组1．00±0．231．00±0．11HG3h组2．12±0．251)4．56±0．541)HG6h组5．79±0．581)7．33±1．061)HG12h组9．66±0．931)12．7±1．371)表4Cdk5/p35、p-Smad-2蛋白在各组足细胞中的表达(n=3，OD值，x±s)组别Cdk5p35p-Smad-2NG组0．43±0．080．27±0．060．21±0．08HG组0．83±0．110．71±0．050．62±0．03HG+SB431542(0．1μmol/L)组0．49±0．081)2)0．41±0．081)2)0．37±0．111)2)HG+SB431542(1．0μmol/L)组0．34±0．071)2)0．21±0．041)2)0．16±0．061)2)HG+SB431542(10μmol/L)组0．11±0．051)2)0．07±0．031)2)0．04±0．021)2)与NG组比较:1)P＜0．05;与HG组比较:2)P＜0．05，下表同·1796·中国老年学杂志2016年4月第36卷
样缓冲液，500μl/管(按1∶4用MilliQ水/灭菌蒸馏水稀释)，反复吹打均匀;分别加入5μlFITC标记的AnnexinV和5μlPI，混匀后避光室温孵育10min，立即上流式细胞仪检测结果。1.3统计学方法采用SPSS13.0软件行方差分析。2结果2.1高糖对足细胞中Cdk5/p35表达的影响Western印迹法检测结果显示，HG组足细胞内Cdk5和p35的蛋白表达水平在高糖培养后有显著增高，明显高于NG组和M组(P＜0.05，图1)，并且随高糖培养时间的延长逐渐增高(图1)。ＲT-PCＲ检测结果显示，Cdk5和p35的mＲNA表达水平在HG组呈时间依赖性显著升高(表1)。图1Western印迹法检测各组足细胞中Cdk5/p35蛋白的表达表1高糖对足细胞中Cdk5/p35蛋白表达的影响(n=3，OD值，x±s)组别Cdk5p35NG组0．27±0．020．25±0．03M组0．24±0．030．23±0．05HG组1．28±0．191)2)1．12±0．141)2)与NG组比较:1)P＜0．05;与M组比较:2)P＜0．052.2SB431542对高糖刺激足细胞中Cdk5/p35表达的影响Western印迹检测结果显示，应用SB431542后，HG+SB431542组足细胞中phospho-Smad-2蛋白表达水平显著降低(图2)，提示高糖刺激引起的TGF-β1通路活化被抑制。应用SB431542后，HG+SB431542组足细胞中Cdk5和p35的蛋白表达水平有明显降低，显著低于NG组和HG组(P＜0.05)，并与SB431542的浓度密切相关，呈浓度依赖性降低，10μmol/LSB431542的抑制效果最显著(图2)。定量PCＲ的检测结果显示，HG+SB431542组足细胞内Cdk5和p35的mＲNA表达水平同SB431542的浓度密切相关，呈浓度依赖性降低，显著低于NG组和HG组(P＜0.05，表2)。2.3抑制Cdk5激酶活性对高糖及TGF-β1刺激足细胞凋亡的影响高糖和TGF-β1培养足细胞后，细胞凋亡率显著升高〔(20.01±1.72)%和(22.03±1.59)%〕，明显高于NG组〔(5.5
【参考文献】：
期刊论文
[1]Cdk5抑制剂Roscovitine对糖尿病大鼠肾功能及nestin表达的影响[J]. 张悦,周毅,张怡,刘巍. 中国药理学通报. 2013(08)
本文编号：3285350
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