Klotho下调miR-21和miR-34抑制糖尿病肾脏病肾小管间质纤维化的作用及机制研究

发布时间：2021-08-02 05:36

　　背景肾小管间质纤维化（Tubulointerstitial fibrosis,TIF）在糖尿病肾脏病（diabetic kidney disease,DKD）进程中起了非常重要的作用。有关Klotho蛋白和多种微小RNA（microRNA,miRNA）对TIF作用的报道很多,但尚未见关于Klotho与miRNA的关系及作用机制的研究。本研究旨在探索Klotho和miR-21a-5p（miR-21）,miR-34a-5p（miR-34）在 DKD 进展中的关系及作用机制;并证实miR-34是通过SIRT1发挥促纤维化作用。方法1、动物实验高脂饮食/链脲佐菌素（the high fat diet-fed and streptozotocin,HFD/STZ）诱导C57BL/6J小鼠制造糖尿病模型,正常同系小鼠作为对照。采用水流动力学方法给成模12w的DM小鼠尾静脉分别转染pCMV-Klotho质粒和pCMV-Vector质粒（n=6）。留取血、尿标本行生化指标检测。取肾脏组织行Masson染色、免疫组化染色。2、细胞培养和转染人肾小管上皮细胞株（HK2）,于含低糖DMEM培养基+10%FB... 

【文章来源】：南方医科大学广东省

【文章页数】：131 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

图１－３两组Ｋｌｏｔｈｏ，?ＦＮ?ａｎｄ?ａＳＭＡ基因的蛋白表达??

与Ｃｏｎｔｒｏｌ组相比，ＤＭ组小鼠肾皮质中Ｋｌｏｔｈｏ蛋白的表达明显减少，而ＦＮ??ａＳＭＡ呈弥漫性表达于肾小管上皮细胞中，与Ｃｏｎｔｒｏｌ组相比，ＤＭ组小鼠肾皮??质中出现明显增多，肾小管上皮细胞呈弥漫性棕色深染（箭头所指）（图１－??４）?〇??Ｍａｓｓｏｎ－Ｔｒｉｃｈｒｏｍｅ?Ｋｌｏｔｈｏ?ＦＮ?ａＳＭＡ??ｍ??■、■??图１－４两组小鼠肾皮质中肾小管间质胶原表达（Ｍａｓｓｏｎ染色，ｘ４００）和Ｋｌｏｔｈｏ、ＦＮ、??ｃｃＳＭＡ蛋白表达情况（ＩＨＣ，ｘ４００）??Ｆｉｇ．?１－４?Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｔｕｂｕｌｏｉｎｔｅｒｓｔｉｔｉａｌ?ｃｏｌｌａｇｅｎ?ｄｅｐｏｓｉｔｉｏｎ?（Ｍａｓｓｏｎ?ｓｔａｉｎｉｎｇ，?ｘ４００）?ａｎｄ??ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｏｆ?Ｋｌｏｔｈｏ、ＦＮ、ａＳＭＡ?ｐｒｏｔｅｉｎ?ｉｎ?ｔｈｅ?ｋｉｄｎｅｙ?ｃｏｒｔｅｘ?ｂｅｔｗｅｅｎ?ｔｗｏ?ｇｒｏｕｐｓ?（ＩＨＣ，?ｘ４００）??２．５?ＨＧ刺激后ＨＫ２中Ｋｌｏｔｈｏ?ｍＲＮＡ和蛋白及ｍｉＲ－２１、ｍｉＲ－３４表达变化??２．５．１?ＨＧ刺激后ＨＫ２中Ｋｌｏｔｈｏ?ｍＲＮＡ和蛋白表达变化??用３０ｍＭ高糖培养ＨＫ２细胞后，Ｋｌｏｔｈｏ?ｍＲＮＡ表达水平在孵育２４ｈ后出??现降低，为?Ｏｈ?的?７３．２１％?（Ｐ＜０．０５），４８ｈ?降为?Ｏｈ?的和?４９．１４％?（Ｐ＜０．０１）；??Ｋｌｏｔｈｏ蛋白表达水平在孵育２４ｈ后出现降低，为Ｏｈ的７２．６２％?（Ｐ＜０．０５），４８ｈ??降为?Ｏｈ?的和?５２．５２％?（Ｐ＜０．０１）（表?１－５

图２－７?Ｃｈｉｐ检测各组ＮＦ－ｋＢ?ｐ６５与ｍｉＲ－３４启动子结合的情况??Ｆｉｇ?２－７．?ＮＦ－ｋＢ?ｐ６５?ｂｉｎｄｉｎｇ?ｔｏ?ｍｉＲ－３４?ｐｒｏｍｏｔｅｒ?ｉｎ?ｖａｒｉｏｕｓ?ｇｒｏｕｐｓ?ｂｙ?ＣｈＩＰ??６１??

【参考文献】：
期刊论文
[1]糖尿病肾病诊治新进展[J]. 薛耀明.  中国处方药. 2005(06)

博士论文
[1]Klotho下调Egr-1抑制糖尿病肾脏病肾小管上皮细胞转分化的作用及机制研究[D]. 李扬.南方医科大学 2017



本文编号：3316996