转录因子ATF3对大鼠Gadd45β/γ基因启动活性的影响及其可能的结合部位

发布时间：2021-08-03 09:22

　　目的 :构建大鼠生长阻滞及DNA损伤诱导基因45（growth arrest and DNA-damage-inducible gene 45,Gadd45）β/γ启动子（全长和截短）荧光素酶报告质粒,并观察在大鼠肾小球系膜细胞（glomerular messangial cells,GMCs）中过表达激活转录因子3（activating transcription factor 3,ATF3）后分别对大鼠Gadd45β/γ基因启动活性的影响。同时筛选其可能的ATF3结合位点。方法:采用PCR技术,将扩增出的大鼠Gadd45β基因启动子全长（-1 105⁺236 nt）和Gadd45γ基因启动子全长（-913⁺72nt）分别插入到荧光素酶报告基因载体p GL3-basic中,获得Gadd45β/γ基因启动子全长荧光素酶报告质粒（p GL3-Gadd45β/γ-FL）,再将p GL3-Gadd45β/γ-FL分别与课题组前期构建的大鼠野生型ATF3过表达质粒（p IRES2/ATF3）共转染GMCs,检测其荧光素酶活性,以确定ATF3对Gadd... 

【文章来源】：南京医科大学学报(自然科学版). 2016,36(01)北大核心CSCD

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【部分图文】：

ATF3对大鼠Gadd45β／γ基因启动子全长活性的影响

所得的测序序列与NCBI上报告序列进行比对后证实，两者序列及插入方向均正确。表明大鼠Gadd45β／γ基因启动子全长荧光素酶报告质粒（pGL3-Gadd45β／γ-FL）已成功构建。2．2ATF3过表达对大鼠Gadd45β／γ基因启动子全长活性的影响按不同实验分组转染后48h，裂解细胞行双荧光素酶报告基因检测。结果显示，pGL3-Gadd45β／γ-FL和pIRES2／ATF3联合转染组，其RLU值显著高于其分各组（图2）。提示，在GMCs中过表达ATF3能够启动Gadd45β／γ基因的转录。1：pGL3-Gadd45β-FL；2：pGL3-Gadd45γ-FL；M：DL2000Marker。图1Gadd45β／γ基因启动子荧光素酶报告质粒的PCR鉴定Figure1IdentificationofGadd45β／γpromoterluciferasereporterplasmidsbyPCR12M2000bp1000bp750bp500bp250bp100bp周梦雅，何风霞，张婧，等．转录因子ATF3对大鼠Gadd45β／γ基因启动活性的影响及其可能的结合部位［J］．南京医科大学学报（自然科学版），2016，36（1）：26－32第36卷第1期2016年1月·29·

南京医科大学学报第36卷第1期2016年1月**P＜0．001vs．pGL3-Gadd45β-FL组。图4ATF3对大鼠Gadd45β基因启动子各截短片段活性的影响Figure4TheeffectsofATF3ontheactivityofdifferenttruncatedratGadd45βgenepromoters25020015010050403020103210RLU值／MEMgrouppGL3-Gadd45β-FLpGL3-basicpGL3-Gadd45β-1pGL3-Gadd45β-2pGL3-Gadd45β-3pGL3-Gadd45β-4******pRL-40＋pIRES2／ATF3**P＜0．001vs．pGL3-Gadd45γ-FL组。图5ATF3对大鼠Gadd45γ基因启动子各截短片段活性的影响Figure5TheeffectsofATF3ontheactivityofdifferenttruncatedratGadd45γgenepromoters2502001501005020151053210RLU值／pGL-3basicpGL3-Gadd45γ-FLpGL3-basicpGL3-Gadd45γ-1pGL3-Gadd45γ-2pGL3-Gadd45γ-3****pRL-40＋pIRES2／ATF32．3大鼠Gadd45β／γ基因启动子各截短片段荧光素酶报告质粒的构建与鉴定大鼠Gadd45β／γ基因启动子各截短片段荧光素酶报告质粒的菌液PCR鉴定结果如图3所示，目的片段大小均相吻合。DNA测序结果亦显示序列及插入方向均正确。表明大鼠Gadd45β／γ基因启动子截短片段荧光素酶报告质粒均已构建成功，可用于后续功能实验。2．4ATF3过表达对大鼠Gadd45β基因启动子各截短片段活性的影响将pGL3-basic、Gadd45β基因启动子全长（pGL3-Gadd45β-FL）和各截短片?


本文编号：3319367