靶向组织蛋白酶K抑制小鼠前列腺癌骨转移和骨破坏的研究

发布时间：2021-08-08 06:50

　　研究背景前列腺癌（PCa）侵袭和转移的过程由涉及多种蛋白酶的蛋白水解级联共同作用,例如基质金属蛋白酶,丝氨酸蛋白酶和半胱氨酸蛋白酶包括组织蛋白酶K（CatK）。CatK主要由破骨细胞分泌,特异性降解胶原蛋白I导致骨质破坏。已知PCa细胞好发骨转移。与原发部位肿瘤和正常前列腺组织相比,PCa骨转移部位的CatK表达水平显著升高。然而,CatK在PCa骨转移的作用机制仍有待阐明。本研究将阐明CatK在小鼠骨中PCa发生发展过程中的功能及作用机制。目的通过体内外实验探讨组织蛋白酶K对前列腺骨转移发生发展的影响。方法通过RT-PCR验证CatK mRNA表达,通过免疫印迹法测定前列腺癌细胞系LNCaP,C4-2B和PC3细胞以及前列腺癌组织中的蛋白质表达。应用ELISA检测细胞上清液和血清中CatK和PSA的蛋白含量。在PCa细胞侵袭方面增加了CatK siRNA敲低实验和CatK抑制剂的效果进一步相互印证。我们进一步研究了剂量依赖性CatK抑制剂对条件培养基诱导的骨吸收的影响。在建立转移动物模型时,将C4-2B细胞注射到SCID小鼠的胫骨中。模型I中在注射肿瘤细胞后立即给予溶剂或Cat K抑... 

【文章来源】：广西医科大学广西壮族自治区

【文章页数】：89 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

CatK在PCa组织中的表达A．显微镜下（×40倍）观察免疫组化染色检测CatK在人前列腺癌及相应非肿瘤性组织中的表达

EC 细胞（图 2-2B）。为了分析 CatK PrEC 细胞、LNCaP 细胞、C4-2B 细胞实验，孵育一抗兔抗 CatK 多克隆抗RP 标记抗鼠、抗兔二抗，采用化学结果显示 C4-2B 细胞和 PC3 细胞表达图 2-2C）。BPrEC LNCaP C4-2B PC3atK

46图 2-3 CatK 抑制剂和下调 CatK 对 C4-2B 细胞侵袭和增殖能力的影响A、B、C、D.分别为显微镜下（×200 倍）观察溶剂组、CatK 抑制剂（1 μM、10 μM、100 μM）组的细胞侵袭情况。E. 通过transwell测定不同剂量的CatK抑制剂对C4-2B侵袭能力的影响。* P < 0.05、# P < 0.001，相对于对照组。F．MTS 法测定不同剂量 CatK 抑制剂对 C4-2B 活力的影响。G．WesternBlot 检测 C4-2B 细胞中敲低 CatK 效果。H．检测 CatK 表达下调后细胞侵袭能力。I．检测 CatK 表达下调后细胞活力。 * P < 0.01，相对于对照组转染细胞。Figure 2-3 To test the effects of CatK inhibitor or knockdown CatK expression on invasion andproliferation in C4-2BA, B, C, D. To observe the cell invasion in the Vehicle group and CatK inhibitor(1 μM, 10 μM, 100 μM)group (×200). E. The effect of different doses of CatK inhibitors on the invasion ability of C4-2B wasdetermined by transwell. * P < 0.05, #P < 0.001 compared to the Vehicle group. F. Examined the C4-2Bcell viability by MTS assay that treated with various doses of CatK inhibitor. G.To evaluate for knockdownCatK protein expression in the C4-2B by Western Blot. H.The ability of CatK expression knockdown cellinvasion was examined. I. CatK expression knockdown cell viability was measured. *P< 0.01 compared tothe control siRNA-transfected cells.

【参考文献】：
期刊论文
[1]组织蛋白酶K在慢性肾脏病中的检测意义[J]. 唐特.  医学理论与实践. 2017(11)
[2]Study of a Novel Antiosteoporosis Screening Model Targeted on Cathepsin K[J]. JUN YANG*, GUANG-DONG SHANG#, AND YUE-QIN ZHANG* *Institute of Medicinal Biotechnology, Chinese Academy of Medical Sciences and Peking Union Medical College, Beijing, 100050, China; #Department of Chemistry and Chemical Biology, Cornell University, USA.  Biomedical and Environmental Sciences. 2004(03)



本文编号：3329452