趋化因子CXC配体12/CXC受体4在前列腺癌细胞的表达及其对细胞增殖的作用机制
发布时间：2021-08-14 12:12
目的检测DU145、PC-3和LNCaP前列腺癌细胞中趋化因子CXC配体（L）12及其受体（R）4的表达,探讨重组人CXCL12对上述细胞增殖的影响及其机制。方法逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）研究CXCL12/CXCR4在DU145、PC-3和LNCaP细胞的表达;CCK-8实验研究重组人CXCL12对DU145、PC-3和LNCaP细胞增殖的作用;Wettern印迹实验研究重组人CXCL12对DU145细胞外调节蛋白激酶（ERK）和磷酶化ERK（pERK）表达的影响。结果 DU145、PC-3和LNCaP细胞均表达CXCL12和CXCR4,重组人CXCL12可明显促进上述细胞的增殖,重组人CXCL12虽然不能改变DU145细胞ERK1/2表达,但可上调pERK1/2的表达。结论前列腺癌细胞表达CXCL12及其受体CXCR4,CXCL12/CXCR4可通过活化丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）/ERK信号通路促进前列腺癌细胞的增殖。
【文章来源】：中国老年学杂志. 2017,37(07)北大核心
【文章页数】：3 页
【部分图文】：
前列腺癌细胞表达CXCL12及CXCＲ2mＲNA
1～3:0、10、40ng/mlCXCL12图2外源性CXCL12上调DU145细胞pEＲK水平3讨论前列腺癌在欧美被称为男性健康的第一大杀手，其发病率位居西方世界男性恶性肿瘤的第一位，而死亡率也已升至第二位，仅次于肺癌〔4〕。前列腺癌在北京男性泌尿生殖系肿瘤中排名第一位、所有肿瘤疾病中排名第五位〔5〕。炎症反应是机体在进化演进过程中形成的具有抵抗及清除病原微生物、异物及坏死组织的一种保护机制。该过程有助于生物体清除异己，从而保证个体的生存，但炎症的长期存在，即慢性炎症，也会导致包括肿瘤在内的多种疾病发生〔6〕。全球约25%的肿瘤是由炎症发展而来的〔7〕。趋化因子属于细胞因子超家族成员，根据邻近氨基端结构性半胱氨酸的排列，其可被分为CXC、CX3C、CC和C四个亚家族。其中CXC亚家族又可依据第一个保守半胱氨酸前是否存有谷氨酸-亮氨酸-精氨酸(ELＲ)结构，进一步分为ELＲ+CXC和ELＲ-CXC两类。尽管趋化因子在炎症和免疫反应中可以活化、吸引及调节粒细胞的迁移，但越来越多的证据显示，趋化因子也参与了肿瘤的增殖、侵袭、转移及血管生成〔8〕。作为ELＲ+CXC类趋化因子中的一员，CXCL12是CXCＲ4的唯一配体。有研究已经证实，CXCL12/CXCＲ4参与了多种肿瘤的发生与演进过程。在包括卵巢癌、小细胞肺癌和脑胶质瘤的许多肿瘤中，CXCL12均可促进表达CXCＲ4肿瘤细胞的增殖与存活〔9～11〕。另外，CXCL12也参与肿瘤细胞的特异性器官转移，Müller等〔12〕研究表明，CXCＲ4高表达于乳腺癌细胞和乳腺癌组织，而乳腺癌常转移的靶组织则高表达其配体CXCL12，CXCＲ4可介导乳腺癌细胞肌动蛋白的聚合和伪足形成，并借助受体与配体的特异性结合，以实现其向靶组织的趋化及转移，这就是所谓的“归巢学?
聚丙烯酰胺凝胶中电泳(电压为110V);将凝胶中蛋白转移至聚偏氟乙烯(PVDF)膜上(电流为300mA，2h);5%的脱脂奶粉室温封闭3h;Tween-20磷酸盐缓冲液(PBST)洗膜3×5min;一抗4℃孵育过夜(β-actin、EＲK和pEＲK浓度均为1∶1000)，PBST洗膜3×5min;HＲP标记的二抗(1∶10000)37℃孵育45min;PBST洗膜4×5min;向膜上加入电化学发光(ECL)显影液，并于全自动化学发光系统中曝光、拍照。1.6统计学方法应用SPSS19.0统计软件行q检验。2结果2.1前列腺癌细胞表达CXCL12及其受体CXCＲ4DU145、PC-3和LNCaP均表达CXCL12及其受体CXCＲ4。见图1。半定量分析表明，与PC-3(0.51±0.08)和DU145(0.29±0.06)比较，LNCaP细胞CXCL12mＲNA表达量(1.34±0.14)明显增高，而CXCＲ4的mＲNA水平在DU145中最高(0.99±0.08)，LNCaP次之(0.62±0.09)，PC-3最低(0.47±0.06)。图1前列腺癌细胞表达CXCL12及CXCＲ2mＲNA2.2外源性CXCL12促进前列腺癌细胞增殖细胞培养72h后，CCK8实验结果表明，外源性CXCL12均可促进DU145、PC-3和LNCaP的增殖，但是各细胞促进增殖的浓度有明显差异(P＜0.05)，DU145的促增殖浓度为10、20和40ng/ml，PC-3为60ng/ml，而LNCaP为10、20、40和60ng/ml。见表2。2.3外源性CXCL12促进DU145细胞EＲK磷酸化(pEＲK)与0ng/mlCXCL12(0.70±0.35、0.55±0.13)比较，10、40ng/ml的CXCL12不能改变EＲK的水平(1.01±0.15、0.94±0.14，P＞0.05)，但可明显促进pEＲK的表达(1.55±0.14、1.56±0.18，P＜0.05)。见图2。表2外源性CXCL12促进前列腺癌细胞增殖(x±s，n=3)组别0ng/ml10ng/ml20ng/ml40ng/ml60ng/mlDU1450.553±0.080.636±0.061)0.666±0.032)0.753±0.042)0.647±0.04PC-30.491±0.040.526±0.060.529±0.060.541±0.040.610±0.031)L
【参考文献】：
期刊论文
[1]中国前列腺癌的流行病学概述和启示[J]. 叶定伟,朱耀. 中华外科杂志. 2015 (04)
本文编号：3342443
【文章来源】：中国老年学杂志. 2017,37(07)北大核心
【文章页数】：3 页
【部分图文】：
前列腺癌细胞表达CXCL12及CXCＲ2mＲNA
1～3:0、10、40ng/mlCXCL12图2外源性CXCL12上调DU145细胞pEＲK水平3讨论前列腺癌在欧美被称为男性健康的第一大杀手，其发病率位居西方世界男性恶性肿瘤的第一位，而死亡率也已升至第二位，仅次于肺癌〔4〕。前列腺癌在北京男性泌尿生殖系肿瘤中排名第一位、所有肿瘤疾病中排名第五位〔5〕。炎症反应是机体在进化演进过程中形成的具有抵抗及清除病原微生物、异物及坏死组织的一种保护机制。该过程有助于生物体清除异己，从而保证个体的生存，但炎症的长期存在，即慢性炎症，也会导致包括肿瘤在内的多种疾病发生〔6〕。全球约25%的肿瘤是由炎症发展而来的〔7〕。趋化因子属于细胞因子超家族成员，根据邻近氨基端结构性半胱氨酸的排列，其可被分为CXC、CX3C、CC和C四个亚家族。其中CXC亚家族又可依据第一个保守半胱氨酸前是否存有谷氨酸-亮氨酸-精氨酸(ELＲ)结构，进一步分为ELＲ+CXC和ELＲ-CXC两类。尽管趋化因子在炎症和免疫反应中可以活化、吸引及调节粒细胞的迁移，但越来越多的证据显示，趋化因子也参与了肿瘤的增殖、侵袭、转移及血管生成〔8〕。作为ELＲ+CXC类趋化因子中的一员，CXCL12是CXCＲ4的唯一配体。有研究已经证实，CXCL12/CXCＲ4参与了多种肿瘤的发生与演进过程。在包括卵巢癌、小细胞肺癌和脑胶质瘤的许多肿瘤中，CXCL12均可促进表达CXCＲ4肿瘤细胞的增殖与存活〔9～11〕。另外，CXCL12也参与肿瘤细胞的特异性器官转移，Müller等〔12〕研究表明，CXCＲ4高表达于乳腺癌细胞和乳腺癌组织，而乳腺癌常转移的靶组织则高表达其配体CXCL12，CXCＲ4可介导乳腺癌细胞肌动蛋白的聚合和伪足形成，并借助受体与配体的特异性结合，以实现其向靶组织的趋化及转移，这就是所谓的“归巢学?
聚丙烯酰胺凝胶中电泳(电压为110V);将凝胶中蛋白转移至聚偏氟乙烯(PVDF)膜上(电流为300mA，2h);5%的脱脂奶粉室温封闭3h;Tween-20磷酸盐缓冲液(PBST)洗膜3×5min;一抗4℃孵育过夜(β-actin、EＲK和pEＲK浓度均为1∶1000)，PBST洗膜3×5min;HＲP标记的二抗(1∶10000)37℃孵育45min;PBST洗膜4×5min;向膜上加入电化学发光(ECL)显影液，并于全自动化学发光系统中曝光、拍照。1.6统计学方法应用SPSS19.0统计软件行q检验。2结果2.1前列腺癌细胞表达CXCL12及其受体CXCＲ4DU145、PC-3和LNCaP均表达CXCL12及其受体CXCＲ4。见图1。半定量分析表明，与PC-3(0.51±0.08)和DU145(0.29±0.06)比较，LNCaP细胞CXCL12mＲNA表达量(1.34±0.14)明显增高，而CXCＲ4的mＲNA水平在DU145中最高(0.99±0.08)，LNCaP次之(0.62±0.09)，PC-3最低(0.47±0.06)。图1前列腺癌细胞表达CXCL12及CXCＲ2mＲNA2.2外源性CXCL12促进前列腺癌细胞增殖细胞培养72h后，CCK8实验结果表明，外源性CXCL12均可促进DU145、PC-3和LNCaP的增殖，但是各细胞促进增殖的浓度有明显差异(P＜0.05)，DU145的促增殖浓度为10、20和40ng/ml，PC-3为60ng/ml，而LNCaP为10、20、40和60ng/ml。见表2。2.3外源性CXCL12促进DU145细胞EＲK磷酸化(pEＲK)与0ng/mlCXCL12(0.70±0.35、0.55±0.13)比较，10、40ng/ml的CXCL12不能改变EＲK的水平(1.01±0.15、0.94±0.14，P＞0.05)，但可明显促进pEＲK的表达(1.55±0.14、1.56±0.18，P＜0.05)。见图2。表2外源性CXCL12促进前列腺癌细胞增殖(x±s，n=3)组别0ng/ml10ng/ml20ng/ml40ng/ml60ng/mlDU1450.553±0.080.636±0.061)0.666±0.032)0.753±0.042)0.647±0.04PC-30.491±0.040.526±0.060.529±0.060.541±0.040.610±0.031)L
【参考文献】：
期刊论文
[1]中国前列腺癌的流行病学概述和启示[J]. 叶定伟,朱耀. 中华外科杂志. 2015 (04)
本文编号：3342443
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/mjlw/3342443.html
最近更新
教材专著
