以HlyA依赖的细胞自噬的增强促进尿路致病性大肠杆菌的排出

发布时间：2021-09-02 17:21

　　背景和目的尿路感染（Urinary tract infection,UTI）是目前世界范围内最为常见的细菌感染性疾病,是由于病原微生物侵入泌尿系统并繁殖而引起的炎症反应,其中约80%的UTI由尿路致病大肠杆菌（Urinary Pathogenic E.coli,UPEC）引起。在美国,UTI每年诊断出的发病率极高,其中男性发病率超过3%,女性发病率超过10%（其中在年龄>65岁的女性中,发病率增加到20%）,而超过60%的女性在一生中都会发生至少一次UTI,更有20%-30%的女性患者频繁复发。尿路致病性大肠杆菌（Uropathogenic Escherichia coli,UPEC）是引起尿路感染最常见的病原菌,UPEC在鞭毛、菌毛,毒素等侵袭因子的协助下致病。UPEC分泌的一种外毒素:α-溶血素（α-hemolysin,HlyA）是一种高效的溶血毒素,典型的RTX（repeats-in-toxin）家族成员。HlyA与尿路感染和败血症有关,其在体内合成原毒素ProHlyA后,会被两个内部赖氨酸（Lys-563和Lys-689）酰化激活,酰化使毒素与细胞膜的结合不可逆转,引发一... 

【文章来源】：郑州大学河南省 211工程院校

【文章页数】：58 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图３．１我国目前尿路感染最主要的致病菌分布图??

?＾???３．?２组织及细胞水平验证ＵＰＥＣ与细胞自噬的关系??⑴验证小鼠尿路感染模型的建立：建立小鼠尿路感染模型（ＵＰＥＣ感染组及??对照组各５只），于感染后的２４小时收取各组每只实验小鼠的尿液，将尿液行??倍比稀释后，分别涂布于ＬＢ固体培养基中，倒置放置于３７°Ｃ恒温无菌环境中??１６－２４小时，待菌落生长出后行菌落计数。两组小鼠中的每只小鼠的２４ｈ．ｐ．ｉ尿液??涂布结果显示，ＵＰＥＣ感染组的小鼠膀胱细菌负荷明显高于对照组（Ｐ＜０．０５）。??如图３．２．１所示。这个结果验证了我们小鼠尿路感染模型建立的成功，为接下来??的组织验证提供了基础和前提。??３００００－１?＊＊＊??ｄ?Ｉ?Ｉ??２００００－??＂Ｄ?ｒｊ?〇??Ｓ５????－Ｊ?Ｄ??ｒａ?＾?１００００－??＾?°?－Ｕ－??ｍ??０Ｊ?，?＂ａｆｌａ???ＵＰＥＣ?ＣＯＮＴＯＲＬ??图３．２．丨建立小鼠尿路感染模型后小鼠膀胱细菌负荷量对比??从图中可明显发现ＵＰＥＣ感染组（红色）各小鼠膀胱细菌负荷远远高于对照组（蓝色）??各小鼠。??（２）组织及细胞水平验证尿路致病性大肠杆菌可以引起细胞自噬的发生：??小鼠尿路感染模型成功建立后，我们收取ＵＰＥＣ感染组与正常组小鼠膀胱，提??取膀胱组织蛋白行Ｗｅｓｔｅｍ－Ｂｌｏｔ实验以分析各组小鼠中作为细胞自噬的Ｍａｒｋｅｒ??蛋白ＬＣ３的表达情况差异，从而在组织水平上明确ＵＰＥＣ引起的尿路感染是否??会引起细胞自嗤。从图中结果可以发现，相比于正常组小鼠，ＩＰＥＣ感染后的小??鼠膀胱组织中ＬＣ３表达量明显较高，如图３．２．２，这个结果提示我们在组织水平??上，

????们接着在体外做了细菌感染，使用ｕｐｅｃ感染膀胱上皮细胞??（ＢＥＣｓ），ＭＯＩｓ＝１００：ｌ。我们提取了感染后１５分钟、３０分钟及６０分钟被ＵＰＥＣ??感染的膀胱上皮细胞的蛋白并进行Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ进行验证。结果可以明显看出，??１５分钟、３０分钟及６０分钟的ＵＰＥＣ感染组中ＬＣ３的表达量明显高于对照组，??这个结果支持了我们建立小鼠尿路感染模型后所得出的结论。??以上结果证实了，由ＵＰＥＣ引起的尿路感染会促进细胞自噬的进程。??


本文编号：3379418