ETS2对肾小管上皮细胞EMT和肾纤维化的作用及其机制研究

发布时间：2021-09-04 06:59

　　背景和目的目前全球范围内有超过13%的人群患有不同程度的慢性肾脏病,慢性肾脏疾病己严重威胁着人类健康。肾小管间质纤维化在肾脏疾病转归中起主导作用,其严重程度是评价肾功能损害程度和疾病预后判断的重要指标。多项研究表明上皮-间充质转分化（endothelial-mesenchymal transition,EMT）在肾脏损伤修复和器官纤维化过程中发挥重要作用,但肾小管上皮细胞发生EMT的分子机制尚未完全阐明,探索肾小管上皮细胞发生EMT的分子调控机制对防治肾脏纤维化具有重要的意义。我们用基因表达谱芯片筛选TGFβ1诱导HK2细胞发生EMT时表达差异的基因,并通过生物信息学分析芯片数据挑选出可能调控HK2细胞EMT的候选基因ETS2和JUNB。目前关于ETS2与JUNB在慢性肾脏纤维化疾病中是否有作用及作用机制的研究未见报道,本研究旨在探讨ETS2和JUNB在肾小管上皮细胞转分化中发挥的作用,以及ETS2是否通过JUNB调控肾小管上皮细胞转分化及肾纤维化进程,为寻找肾纤维化新的治疗靶点提供理论基础。方法和结果1.采用基因表达谱芯片筛查出TGFβ1刺激HK2细胞后共有587个基因表达发生了差异... 

【文章来源】：南方医科大学广东省

【文章页数】：124 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

图１－２应用基因表达谱芯片筛选ＴＧＦＰ丨刺激ＨＫ２细胞基因表达情况

—Ｊ??■Ａ晒??？ｓｔｊ２｛ｆ＾ｄ?ｃｈ？＜ｒ？＞??图１－２应用基因表达谱芯片筛选ＴＧＦＰ丨刺激ＨＫ２细胞基因表达情况。（Ａ）聚类分析图；??（Ｂ）散点图；（Ｃ）火山图。??Ｆｉｇｕｒｅ?１－２?Ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ?ａｎａｌｙｓｉｓ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ?ｇｅｎｅｓ?ｉｎ?ＨＫ２?ｃｅｌｌｓ?ｗｉｔｈ?ＴＧＦｐｉ?ｔｒｅａｔｍｅｎｔ．??３．２．２基因表达谱芯片筛选出的表达差异基因进行生物信息分析??我们将基因表达谱芯片筛选出的表达差异基因、文献中查找与纤维化相关??的基因以及其他研宄者做的肾脏纤维化基因表达谱芯片筛查的表达差异基因一??起交给公司做生物信息分析，筛选出１２个候选基因。我们对这１２个基因设计引??物，在ＨＫ２细胞纤维化模型中验证它们的表达情况。图１－３和表１－２显示的是这１２??个候选基因在基因表达谱芯片中的表达变化，与Ｃｏｎｔｒｏｌ组相比，ＴＧＦ（３１刺激细胞??后ＥＬＫ３、ＥＴＳ２、Ｆ０ＸＣ１、ＦＯＸＤ１、ＳＯＸ９、ＪＵＮＢ、ＥＧＲ２和ＮＩＲ２Ｆ１?基因的表达??量上调２倍以上，具有统计学差异（Ｐ＜０．０５）；而ＰＡＸ８、Ｆ０ＸＡ１、ＥＰＡＳ１和ＣＥＢＰＤ??３０??

?｜Ｕ??－８?：??图１－３基因表达谱芯片筛选ＴＧＦｐｉ刺激ＨＫ２细胞表达有差异的部分基因。??Ｆｉｇｕｒｅｌ－３?Ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ?ｓｃｒｅｅｎ?ｏｆ?ｐａｒｔ?ｏｆ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ?ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ?ｇｅｎｅｓ?ｉｎ?ＨＫ２?ｗｉｔｈ??ＴＧＦｐｉ?ｔｒｅａｔｍｅｎｔ．??表１－２基因表达谱芯片筛选ＴＧＦ（３１刺激ＨＫ２细胞表达有差异的部分基因（ｘ：ｈＳＤ，ｎ＝４）。??Ｔａｂｌｅｌ－２?ＭｉｃｒｏａｉＴａｙ?ｓｃｒｅｅｎ?ｏｆ?ｐａｒｔ?ｏｆ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ?ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ?ｇｅｎｅｓ?ｉｎ?ＨＫ２?ｗｉｔｈ??ＴＧＦｐｉ?ｔｒｅａｔｍｅｎｔ?（?ｘ±?ＳＤ?，ｎ＝４）．??Ｇｒｏｕｐｓ?ＥＬＫ３?ＥＴＳ２?ＦＯＸＣ１?ＦＯＸＤ１??ＴＧＦＰ?组／Ｃｏｎｔｒｏｌ?组?３．１２?２．０８?３．１５?２．０５??Ｇｒｏｕｐｓ?ＳＯＸ９?ＪＵＮＢ?ＥＧＲ２?ＮＲ２Ｆ１??ＴＧＦＰ?组／Ｃｏｎｔｒｏｌ?组?３．１９?２．３９?７．５０?２．７６??Ｇｒｏｕｐｓ?ＰＡＸ８?ＦＯＸＡ１?ＥＰＡＳ１?ＣＥＢＰＤ??ＴＧＦＰ?组／Ｃｏｎｔｒｏｌ?组?－２．２４?－２．０３?－６．６４?－４．３７??为确保基因芯片结果的准确性，我们按３．１中的方式重新处理两组细胞，提??取ＲＮＡ并逆转录成ｃＤＮＡ后，用实时荧光定量ＰＣＲ?（ｑＲＴ－ＰＣＲ）的方法逐一验证，??在验证的这１２个基因中，尽管基因表达差异倍数与芯片结果不完全一致，但每??个基因的表达趋势完全一致


本文编号：3382802