前列腺癌中P62通过维持HDAC6活性抑制自噬及促进上皮间质转化态形成的研究

发布时间：2021-09-07 01:08

　　研究背景:P62（也称sequestosome-1或SQSTM1）可通过多种途径参与自噬的调控。它可与自噬体膜蛋白LC3-II相结合,促使泛素化蛋白聚集体被自噬体吞噬,与组蛋白去乙酰化酶HDAC6相作用抑制其去乙酰化酶活性,从而维持乙酰化α-微管蛋白的水平及微管蛋白的稳定性,调控自噬体转运过程。此前研究对人前列腺癌（Prostate Cancer,PCa）及良性前列腺增生患者（Benign Prostatic Hyperplasia,BPH）组织进行免疫组化实验,发现前列腺癌患者的P62水平显著高于前列腺增生患者,且高水平的P62与肿瘤的分级及转移密切相关。在此基础上,本研究拟进一步探明P62对前列腺癌增殖、侵袭、转移及自噬的影响,并探讨其中可能的作用机制。研究方法:本研究通过慢病毒载体技术构建了P62过表达DU145细胞株,并利用CRISPR/Cas9技术构建P62敲除DU145细胞株,进行CCK8及结晶紫染色等细胞增殖实验、细胞迁移实验、细胞侵袭实验;以及Western blot免疫印迹分析和共聚焦荧光显微镜的应用来阐明P62水平的改变对PCa细胞增殖、迁移、侵袭、上皮-间质转化态... 

【文章来源】：广州医科大学广东省

【文章页数】：50 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

（A和C图）分别代表P62过表达对照组（C1）和P62过表达组（OE）DU145细胞

图 2. P62 抑制细胞自噬。（A 和 B 图）分别代表在巴普罗霉素 A1 作用下（BAF）及无巴普罗霉素 A1 作用下（Ctrl）细胞自噬标志物蛋白 LC3-II 的表达水平的蛋白免疫印迹分析条带及量化统计结果；（C 和 D 图）分别代表各组 DU145 细胞中 LRPPRC 蛋白免疫印迹分析条带及量化统计结果；**, P≤0.01; ***, P≤0.001。2．P62 促进 PCa 细胞上皮间质转化态的形成我们在研究过程中发现，P62 的表达变化显著影响 DU145 细胞形态的改变：存在由上皮样形态切换到间充质样外观的变化。相应地，DU145 细胞的形状由圆形细胞变得不规则多边形（图 3A）。这提示过表达 P62 参与调节上皮-间质转化的形态转变。上皮间质转化（EMT）是癌症转移的重要事件[29]。在癌的转移过程中，极化上皮肿瘤细胞具有迁移性和侵袭性，以便从原发肿瘤部位传播[30-33]。因此，我们对这两类细胞上的特异标记蛋白进行检测。可以发现，对照组 DU145

图 3. P62 促进细胞上皮-间质转化。（A 图）表示各实验组及对照组细胞在 10 倍及 40 倍镜下的形态对比图像；（B-J 图）代表蛋白免疫印迹分析条带（B，E 和 H）及量化统计结果（C,D, F, G, I,和 J）；上皮细胞特征标志蛋白 E-钙粘蛋白表达水平（B-D）；间质细胞特征标志蛋白波形蛋白 Valentine 表达水平（E-G）及纤维蛋白 Fibronectin 表达水平（H-J）；**, P≤0.01;***, P≤0.001。3．P62 增强组蛋白去乙酰化酶 HDAC6 的活性并抑制去乙酰化-α-微管蛋白的形成研究表明，组蛋白去乙酰化酶 6 的水平（HDAC6）是上皮细胞向间充质细胞转型过程中对细胞迁移和侵袭的必要因素[31, 34]。抑制 HDAC6 表达可以增加 α-微管蛋白的乙酰化水平，从而降低微管运动，减少局部粘附的转化率和降低细胞迁移[35]；此外，乙酰化微管是自噬体与溶酶体融合转运过程必需的[36]，激活


本文编号：3388549