肾肉瘤样癌细胞系的建立和肾癌噬菌体展示肽库的构建

发布时间：2021-10-10 23:33

　　目的：建立汉族人肾肉瘤样癌细胞系，研究该细胞系的生物学特性，筛选肾肉瘤样癌高转移性细胞亚型；构建肾癌噬菌体展示肽库和肾透明细胞癌特异性噬菌体展示肽库，进行肾细胞癌早期检测分子标志物的筛选。方法：（1）采用1例肾肉瘤样癌新鲜手术标本，于手术后30-60min内用植块法进行体外培养，确定肿瘤病理学特点和染色体众数，记录细胞系的生长曲线，集落形成率，应用流式细胞仪检测细胞的肿瘤干细胞表面标志物。（2）构建肾癌噬菌体展示肽库：收集肾癌组织标本30例和肾癌细胞系3种48瓶。利用Trizol试剂抽提总RNA，用纯化试剂盒抽提mRNA，再经过反转录、末端平齐化、加EcoRⅠ/HindⅢ接头、HindⅢ和EcoRⅠ双酶切、大小片段筛选、连接载体臂、噬菌体体外包装等一系列反应，成功构建了肾癌噬菌体展示肽库。（3）肾癌特异性的噬菌体的富集：用正常对照和肾癌患者的血清进行五轮正负向亲和筛选，以富集可以和肾癌患者血清中自身抗体相结合的特异性噬菌体单克隆。（4）肾癌特异性噬菌体的筛选：五轮正负向筛选后，随机挑选了的2000个噬菌体单克隆，用ELISA法进行初筛。结果：（1）肿瘤组织样本免疫组化结果显示：Vime... 

【文章来源】：中国人民解放军海军军医大学上海市 211工程院校

【文章页数】：75 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
缩略词表
前言
第一部分 肾肉瘤样细胞癌细胞系的建立
    一、材料
    二、方法
    三、结果
    四、讨论
第二部分 肾癌噬菌体展示肽库的构建
    一、材料
    二、方法
    三、结果
    四、讨论
总结
参考文献
综述
    参考文献
硕士期间研究成果
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]Vimentin、Ki-67在透明细胞性肾细胞癌组织中的表达及其与MVD的相关性研究[J]. 张丽娜,张淑敏.  中国实验诊断学. 2012(03)
[2]细胞黏附分子CD99与肿瘤关系的研究进展[J]. 林丽萍,武旗,曹广文.  第二军医大学学报. 2009(03)
[3]Recombinant human B7-H4 expressed in Escherichia coli inhibits T lym-phocyte proliferation and IL-2 secretion in vitro[J]. Yi-xiang MAO~(2,3)Yong-Jing CHEN~2 Yan GE~2 Hong-bing MA~2 Jian-feng YU~2 Hong-ya WU~2 Yu-min HU~2 Qin WANG~2 Qin SHI~2 Xue-guang ZHANG~(2,4)2 Institute of Biotechnology,Soochow University,Suzhou 215007,China;3 Department of Oncology,First Affiliated Hospital to Soochow University,Suzhou 215007,China.  Acta Pharmacologica Sinica. 2006(06)
[4]肿瘤细胞E-cadherin的表达与对基底膜浸润能力的关系[J]. 车向明,王曙逢,王康,盛薇,刘晓毅.  西安交通大学学报(医学版). 2004(03)
[5]上海市区恶性肿瘤发病趋势分析（1972～1999年）[J]. 刘恩菊,项永兵,金凡,周淑贞,孙璐,方茹蓉,阮志贤,高立峰,高玉堂.  肿瘤. 2004(01)
[6]中国部分市县肾癌及泌尿系其他恶性肿瘤发病趋势比较研究[J]. 马建辉,李鸣,张思维,那彦群,陈万青.  中华泌尿外科杂志. 2009 (08)

博士论文
[1]USP11抑制TNFα介导的NF-κB激活途径及其在转移性肾透明细胞癌中的作用[D]. 谭晓（？）.第二军医大学 2010

硕士论文
[1]B7-H4在肾透明细胞癌中的表达及其临床意义[D]. 徐一鹏.福建医科大学 2012
[2]肺癌和大肠癌早期筛查自身抗体标志群的筛选[D]. 吴玲玲.第二军医大学 2010
[3]噬菌体展示肽库筛选大肠癌早期检测分子标志群[D]. 曹付傲.第二军医大学 2010
[4]人原代肾细胞癌转移性和非转移性细胞的体内外筛选[D]. 谭晓（丰刀女）.第二军医大学 2005



本文编号：3429360