高糖在高磷诱发血管平滑肌细胞衰老和钙化中的作用及其机制

发布时间：2021-10-13 10:55

　　背景和目的血管钙化是糖尿病及慢性肾脏病（chronic kidney disease,CKD）患者最常见的并发症之一,与心血管事件的发生密切相关。衰老、炎症、氧化应激、尿毒症、高磷血症、高血糖等是VC发生发展中的重要因素。其中,钙磷代谢紊乱及其引起的高磷血症是诱发血管钙化常见因素。NAD+依赖的去乙酰化酶Sirtuin 1（SIRT1）是一种调节细胞衰老和炎症反应的组蛋白去乙酰化酶,在调控高糖或高磷相关的血管钙化中起着重要作用。然而,高血糖是否可促进高磷血症诱发的血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells,VSMCs）钙化及其促进钙化的具体机制尚不明确。因此,本研究旨在探讨高糖在高磷诱导VSMCs衰老和钙化中的作用及SIRT1参与其调控的分子机制。方法1.小鼠原代VSMCs的培养与鉴定:分离小鼠胸腹主动脉,利用组织块贴壁法培养小鼠VSMCs,免疫荧光检测平滑肌细胞特异性标记分子平滑肌22α（smooth muscle 22 alpha,SM22α）和α平滑肌肌动蛋白（alpha smooth muscle-actin,α-SMA）。2.以小鼠原代培养的VS... 

【文章来源】：安徽医科大学安徽省

【文章页数】：64 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

原代小鼠VSMCs形态及α-SMA,SM22α标记分子的免疫荧光分析

安徽医科大学硕士学位论文27Fig2.BothphosphateoverloadandhighglucosepromotephosphatedepositionowingtoosteogenictransdifferentiationofVSMCs.图2.高糖高磷通过VSMCs成骨样转分化促进钙磷乘积。A.Westernblottinganalysisforthemarkersofosteoblasts(RUNX2、BMP2)，α-SMAandPit-1.B.AlizarinredstainingfordetectionmineraldepositioninVSMCswithphosphateor/andhighglucose.C.QuantificationofVSMCcalcificationinducedbyHPiand/orHG.D.Calciumcontentwasnormalizedtototalcellularprotein,asdeterminedbyabicinchoninicacidproteinassay.*P<0.05;**P<0.01;***P<0.001.3.2药理改变SIRT1活性影响VSMCs向成骨细胞转分化及钙化。为探讨高磷和高糖诱导VSMCs成骨样转分化相关血管钙化的可能机制，本研究首先用WB实验检测了磷酸盐超负荷或高糖诱导的VSMCs中SIRT1的表达。结果显示，与对照组相比，高糖或高磷处理9天后，SIRT1的表达明显减少(Fig3A)。根据免疫荧光分析结果，高磷或高糖处理细胞后，SIRT1的表达也明显下

安徽医科大学硕士学位论文29Fig3.PharmacologicalchangestheactivityofSIRT1regulatesosteoblastictransdifferentiationandcalciumdepositionofVSMCsbyexposuretohighglucoseandphosphateoverload.图3.药理改变SIRT1活性调控高糖高磷诱导的VSMCs的成骨转分化和钙化。A.TheexpressionofSIRT1proteininVSMCsculturedwithnormal,HPiand/orHGmediumover3and9days.B.ImmunofluorescenceanalysisfordeterminingthesenescentVSMCsculturedwithnormal,HPi


本文编号：3434522