活性维生素D3通过wnt/β-连环蛋白信号通路抑制TGFβ1诱导的人肾小管上皮细胞转分化研究
发布时间：2021-10-30 13:22
目的 通过观察活性维生素D3（1,25-（OH）2D3）对TGFβ1诱导的人肾小管上皮细胞（HK-2）间充质转分化以及wnt/β-catenin信号通路的影响,探索活性维生素D3延缓肾脏纤维化进展的可能机制,为活性维生素D3临床延缓慢性肾脏病进展提供实验依据。方法 角质细胞培养基体外培养HK-2细胞,第一部分:筛选活性维生素D3最佳效应剂量,先将HK-2细胞分为五组,（1）正常对照组;（2）TGFβ1组（10ng/ml）;（3）TGFβ1（10ng/ml）+10-7mol/l活性维生素D3组;（4）TGFβ1（10ng/ml）+10-8mol/l活性维生素D3组;（5）TGFβ1（10ng/ml）+10-9mol/l活性维生素D3组。培养48小时,显微镜下观察各组细胞形态变化,应用实时荧光定量PCR技术检测各组细胞α-SMA、E-cadherin mRNA表达变化;Western Blot检测各组细胞α-SMA蛋白表达变化;根据实验结果筛选活性维生素D3的最佳效应剂量。采用划痕试验检测正常对照组、T...
【文章来源】：甘肃中医药大学甘肃省
【文章页数】：64 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
中英文缩略词表
1 前言
2 材料与方法
2.1 实验材料
2.1.1 细胞
2.1.2 主要试剂、耗材及公司
2.1.3 主要仪器设备及厂家
2.1.4 主要溶剂配制
2.2 实验方法
2.2.1 HK-2 细胞的复苏、培养、传代及冻存
2.2.2 实验分组
2.2.3 Western blot检测相关蛋白的表达
2.2.4 划痕实验检测HK-2 细胞迁移能力
2.2.5 实时荧光定量PCR检测
2.2.6 细胞免疫荧光检测
2.2.7 统计学分析
3 实验结果
3.1 TGFβ1对HK-2 细胞EMT的影响
3.1.1 细胞形态学变化
3.1.2 TGFβ1对HK-2 细胞E-cadherin、α-SMA表达的影响
3.1.3 TGFβ1对HK-2 细胞迁移能力的影响
3.2 TGFβ1对HK-2 细胞wnt/β-catenin信号通路活性的影响
3.2.1 TGFβ1对P-GSK3β/GSK3β、β-catenin表达的影响
3.3 活性维生素D3对TGFβ1 诱导的HK-2 细胞EMT的影响
3.3.1 细胞形态的变化
3.3.2 不同剂量活性维生素D3对α-SMA及 E-cadherin表达的影响
3.3.3 活性维生素D3对TGFβ1 诱导的HK-2 细胞迁移能力的影响
3.4 活性维生素D3对TGFβ1 诱导的HK-2 细胞wnt/β-catenin信号通路的影响
3.4.1 活性维生素D3对TGFβ1 诱导的P-GSK3β/GSK3β、β-catenin表达的影响
3.4.2 Wnt信号通路激活剂Licl对活性维生素D3 干预效果的影响
4 讨论
4.1 HK-2 细胞转分化模型
4.2 活性维生素D3对HK-2 细胞EMT的干预作用
4.3 活性维生素D3 干预HK-2 细胞EMT的分子机制
5 结论
参考文献
综述
参考文献
致谢
在学期间的研究成果
【参考文献】：
期刊论文
[1]转化生长因子-β与肾脏纤维化的研究进展[J]. 孟晓明,蓝辉耀. 生理学报. 2018(06)
[2]Mechanism of combined use of vitamin D and puerarin in anti-hepatic fibrosis by regulating the Wnt/β-catenin signalling pathway[J]. Gan-Rong Huang,Si-Jun Wei,Yan-Qiang Huang,Wei Xing,Lu-Yao Wang,Ling-Ling Liang. World Journal of Gastroenterology. 2018(36)
[3]活性维生素D在肾纤维化中的治疗作用及机制[J]. 刘萍,席春生. 中国中西医结合肾病杂志. 2018(09)
[4]高尿酸通过PI3K/Akt信号通路促进肾小管上皮细胞转分化[J]. 熊晓燕,白寿军,王亚琨,姬婷婷,杜红秀,李肖瑛,高聪普,刘娟,朱迎春,查芳芳. 中华肾脏病杂志. 2018 (02)
[5]低剂量雷公藤甲素抑制Wnt3α/β-catenin信号通路活性改善高剂量D-葡萄糖诱导的足细胞转分化[J]. 石格,吴薇,万毅刚,何伟明,涂玥,韩文贝,刘不悔,刘莹露,万子玥. 中国中药杂志. 2018(01)
[6]肾脏纤维化机制的研究进展[J]. 陈腾锋,谢庆祥,张跃红. 国际泌尿系统杂志. 2011 (03)
本文编号：3466805
【文章来源】：甘肃中医药大学甘肃省
【文章页数】：64 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
中英文缩略词表
1 前言
2 材料与方法
2.1 实验材料
2.1.1 细胞
2.1.2 主要试剂、耗材及公司
2.1.3 主要仪器设备及厂家
2.1.4 主要溶剂配制
2.2 实验方法
2.2.1 HK-2 细胞的复苏、培养、传代及冻存
2.2.2 实验分组
2.2.3 Western blot检测相关蛋白的表达
2.2.4 划痕实验检测HK-2 细胞迁移能力
2.2.5 实时荧光定量PCR检测
2.2.6 细胞免疫荧光检测
2.2.7 统计学分析
3 实验结果
3.1 TGFβ1对HK-2 细胞EMT的影响
3.1.1 细胞形态学变化
3.1.2 TGFβ1对HK-2 细胞E-cadherin、α-SMA表达的影响
3.1.3 TGFβ1对HK-2 细胞迁移能力的影响
3.2 TGFβ1对HK-2 细胞wnt/β-catenin信号通路活性的影响
3.2.1 TGFβ1对P-GSK3β/GSK3β、β-catenin表达的影响
3.3 活性维生素D3对TGFβ1 诱导的HK-2 细胞EMT的影响
3.3.1 细胞形态的变化
3.3.2 不同剂量活性维生素D3对α-SMA及 E-cadherin表达的影响
3.3.3 活性维生素D3对TGFβ1 诱导的HK-2 细胞迁移能力的影响
3.4 活性维生素D3对TGFβ1 诱导的HK-2 细胞wnt/β-catenin信号通路的影响
3.4.1 活性维生素D3对TGFβ1 诱导的P-GSK3β/GSK3β、β-catenin表达的影响
3.4.2 Wnt信号通路激活剂Licl对活性维生素D3 干预效果的影响
4 讨论
4.1 HK-2 细胞转分化模型
4.2 活性维生素D3对HK-2 细胞EMT的干预作用
4.3 活性维生素D3 干预HK-2 细胞EMT的分子机制
5 结论
参考文献
综述
参考文献
致谢
在学期间的研究成果
【参考文献】：
期刊论文
[1]转化生长因子-β与肾脏纤维化的研究进展[J]. 孟晓明,蓝辉耀. 生理学报. 2018(06)
[2]Mechanism of combined use of vitamin D and puerarin in anti-hepatic fibrosis by regulating the Wnt/β-catenin signalling pathway[J]. Gan-Rong Huang,Si-Jun Wei,Yan-Qiang Huang,Wei Xing,Lu-Yao Wang,Ling-Ling Liang. World Journal of Gastroenterology. 2018(36)
[3]活性维生素D在肾纤维化中的治疗作用及机制[J]. 刘萍,席春生. 中国中西医结合肾病杂志. 2018(09)
[4]高尿酸通过PI3K/Akt信号通路促进肾小管上皮细胞转分化[J]. 熊晓燕,白寿军,王亚琨,姬婷婷,杜红秀,李肖瑛,高聪普,刘娟,朱迎春,查芳芳. 中华肾脏病杂志. 2018 (02)
[5]低剂量雷公藤甲素抑制Wnt3α/β-catenin信号通路活性改善高剂量D-葡萄糖诱导的足细胞转分化[J]. 石格,吴薇,万毅刚,何伟明,涂玥,韩文贝,刘不悔,刘莹露,万子玥. 中国中药杂志. 2018(01)
[6]肾脏纤维化机制的研究进展[J]. 陈腾锋,谢庆祥,张跃红. 国际泌尿系统杂志. 2011 (03)
本文编号：3466805
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/mjlw/3466805.html
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