TM7SF1与糖尿病肾病小鼠表型和其影响足细胞自噬的机制研究

发布时间：2021-11-07 21:08

　　目的:探讨TM7SF1基因下调与糖尿病肾病C57BL/6J小鼠的相关性表型。方法:使用Crispr/Cas9的技术,利用非同源重组修复引入突变的方式,构建TM7SF1基因全身敲除的C57BL/6J小鼠模型。使用STZ腹腔注射的方法构建TM7SF1-/-和TM7SF1+/+小鼠的糖尿病肾病模型。检测两种基因型的糖尿病肾病模型小鼠表型差异包括尿蛋白,尿肌酐,肾脏系数,血清生化指标,肾脏形态学及足细胞相关蛋白和自噬相关的表达。结果:1.TM7SF1-/-和TM7SF1+/+小鼠同时构建糖尿病肾病模型,随着小鼠周龄的增加,两组小鼠的尿蛋白都呈增多趋势,但是与TM7SF1+/+相比较,TM7SF1-/-小鼠的尿蛋白增多（造模第11周时最为显著,P<0.05）。2.两组糖尿病肾病模型的小鼠都出现肾小管线粒体损伤,但与TM7SF1+/+小鼠相比较,TM7SF1-/-小鼠更为严重。TM7SF1-/-小鼠还出现了足细胞的融合,TM7SF1+/+小鼠并未出现。结论:TM7SF1缺失会加速C57BL/6J小鼠糖尿病肾病病程,引起尿蛋白增多,也会出现肾脏组织自噬功能的紊乱。目的:探讨TM7SF1基因下调... 

【文章来源】：皖南医学院安徽省

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【学位级别】：硕士

【部分图文】：

TM7SF1基因Cas9/gRNA设计策略示意图

皖南医学院硕士学位论文21结果1.TM7SF1-/-小鼠的构建和鉴定1.1TM7SF1-/-小鼠构建TM7SF1杂合子小鼠有委托上海南方模式生物科技股份有限公司成功构建。TM7SF1基因突变体是使用Crispr/Cas9技术,用过非同源重组修复引入突变的方式，造成TM7SF1基因蛋白读码框移码，功能缺失。针对TM7SF1基因的3号外显子设计了Cas9/gRNA（图1）。我们再通过TM7SF1杂合子小鼠雌雄合笼繁育子代小鼠。新生小鼠出生4周后打耳标并剪取鼠尾鉴定基因型。小鼠基因型确定后，小鼠按照性别和基因型进行分笼，6-8周龄可供实验使用。图1TM7SF1基因Cas9/gRNA设计策略示意图1.2TM7SF1-/-小鼠基因型鉴定提取小鼠鼠尾总DNA，通过PCR扩增目的片段，从DNA水平上确定小鼠基因型。图2TM7SF1基因缺失小鼠模型基因型鉴定引物设计

皖南医学院硕士学位论文221.2.2小鼠基因型判断小鼠基因组使用引物对（P3，P4）分别扩增：TM7SF1+/+：只能扩增出1400bp左右的条带；TM7SF1+/-：分别能扩增出600bp和1400bp左右的条带；TM7SF1-/-：只能扩增出600bp左右的条带。如图3所示：TM7SF1+/+小鼠：282，288TM7SF1+/-小鼠：279，281，283，284，286TM7SF1-/-小鼠：280，285，287图3鼠尾总DNA的PCR产物琼脂糖凝胶电泳结果2TM7SF1-/-和TM7SF1+/+小鼠的糖尿病肾病模型构建及表型2.1TM7SF1-/-和TM7SF1+/+小鼠的糖尿病肾病模型构建使用链脲佐菌素腹腔注射的方式构建糖尿病小鼠并维持空腹血糖＞11.1mmol/L。（1）监测了未经STZ注射的7-20周TM7SF1-/-和TM7SF1+/+小鼠的空腹血糖均在正常范围以内＜6.1mmol/L。相同周龄的TM7SF1-/-和TM7SF1+/+小鼠的空腹血糖间并无差异（图4）。图4TM7SF1-/-和TM7SF1+/+小鼠空腹血糖。

【参考文献】：
期刊论文
[1]糖尿病肾病检验中尿蛋白和尿微量白蛋白的应用研究[J]. 邓志航,钟德,苏泳恩,申慧敏,麻春桃.  临床检验杂志(电子版). 2020(01)
[2]中国2型糖尿病防治指南（2017年版）[J]. Chinese Diabetes Society;.  中国实用内科杂志. 2018(04)
[3]全球糖尿病疾病负担现状[J]. 侯清涛,李芸,李舍予,田浩明.  中国糖尿病杂志. 2016(01)



本文编号：3482409