CNF1下调巨噬细胞CD36转录引起急性尿路感染

发布时间：2021-11-14 05:21

　　目的:尿路感染包括膀胱炎和肾盂肾炎主要由尿路致病性大肠杆菌（UPEC）引起,并且如果早期急性炎症没有控制将会形成慢性持续性感染,肾瘢痕和肾衰竭。因此发现尿路致病性大肠杆菌的主要致病毒力因子及探究它引起尿路感染的致病机制对于预防和治疗尿路感染疾病尤为重要。细胞毒性坏死因子（CNF1）是尿路致病性大肠杆菌关键毒素蛋白,但是它对尿路致病性大肠杆菌的致病机制及宿主的具体防御作用还不清楚。天然免疫应答是宿主有效抵御UPEC感染的主要方式,中性粒细胞和巨噬细胞在急性尿道感染中对细菌清除起主要作用。然而天然免疫应答必须得到有效调控,否则会造成严重的组织损伤。CD36是重要的清道夫受体之一,在巨噬细胞中负责病原体和凋亡细胞清除,因此在宿主免疫防御和动态平衡中发挥重要作用。目前尚未报道细菌毒素对CD36的调节。本论文拟解决以下三个问题:1.系统研究CNF1在急性尿道感染中对细菌清除和组织炎性损伤的作用;2.研究CNF1对巨噬细胞CD36在表达和转录水平的影响;3.研究CNF1对CD36的分子调节机制。方法:1.在UPEC菌株CFT073中引入cnf1基因,构建CNF1的组成型表达菌株（CFT073-CN... 

【文章来源】：天津医科大学天津市 211工程院校

【文章页数】：139 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

(A)CFT073-CNF1和CFT073空载菌生长曲线

16图 1.2 尿路感染雌鼠 C57BL/6J 109CFT073-CNF1 和 CFT073 空载菌，以 3小时间隔分别感染 2 次。在感染 24，48 和 72 小时流式检测外周血（A），膀胱（B）和肾脏（C）中性粒细胞占总细胞的比例 (n=6 至 10, 2 次重复实验)。数据以均数±标准误表示，非参数秩和检验，*P< 0.05。1.2.3 CNF1 对巨噬细胞募集无影响使用小鼠肾盂肾炎模型，小鼠尿道感染表达 CNF1 的 CFT073 和空载对照CFT073。在感染 48 小时后取小鼠眼球外周血，膀胱和肾脏组织，流式检测巨噬细胞（CD11b+F4/80 双阳性代表组织巨噬细胞）量变化。结果表明 CFT073-CNF1感染小鼠的膀胱，肾脏组织和血液中巨噬细胞比例和 CFT073 空载对照组无差别（图 1.3）。这表明 CNF1 对尿路感染组织巨噬细胞浸润无影响。

17图 1.3 尿路感染雌鼠 C57BL/6J 109CFT073-CNF1 和 CFT073 空载菌，以 3小时间隔分别感染 2 次。在感染 48 小时流式检测外周血（A），膀胱（B）和肾脏（C）中巨噬细胞占总细胞的比例 (n= 10, 2 次重复实验)。数据以均数±标准误表示，非参数秩和检验，*P< 0.05。1.2.4 CNF1 加重肾脏和膀胱的损伤使用小鼠肾盂肾炎模型，小鼠尿道感染表达 CNF1 的 CFT073 和空载对照CFT073。在感染 48 小时后取材，膀胱和肾脏大体拍照并且做石蜡包埋，切片和H＆E 染色。结果发现，感染 CNF1-CFT073 的膀胱和肾组织中募集更多炎性细胞浸润（白色箭头指示浸润的炎性细胞），更严重的水肿和尿路上皮损伤（图1.4）。


本文编号：3494038