EGFP修饰慢病毒载体感染脂肪源间充质干细胞治疗顺铂诱导小鼠急性肾损伤的研究

发布时间：2021-11-15 03:11

　　背景顺铂是一种广泛应用于临床的化疗药物。然而,由于顺铂严重的副作用,特别是肾毒性,临床应用受到严重限制。由于顺铂有多个分子靶点,阻止某一个靶点只可能起到部分肾保护。因此治疗顺铂诱导的肾损伤需要新策略。干细胞为基础治疗方法,与药物治疗相比有很多潜在优势,包括分泌多种细胞因子、与宿主细胞融合、活化内源性干细胞以及替代损伤的细胞等。多项研究表明间充质干细胞（mesenchymal stem cells, MSCs）具有治疗急性肾损伤（acute kidney injury, AKI）潜能。脂肪组织内贮备的MSCs量非常丰富。脂肪源间充质干细胞（adipose-derived mesenchymal stem cells, ADMSCs）优点很多,如容易分离培养、体外扩增快、免疫原性低、不存在伦理问题等。近年来MSCs治疗AKI的研究很多,但其治疗机制仍然存在争议。目的1.筛选出慢病毒载体（lentiviral vector, LV）感染ADMSCs的最佳感染指数（multiplicity of infection, MOI）并鉴定其感染后的增殖能力。2.探讨同种异体ADMSCs治疗顺铂诱导小... 

【文章来源】：新乡医学院河南省

【文章页数】：66 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
前言
第一部分 KM小鼠ADMSCs的分离、鉴定及感染
    1 材料和方法
        1.1 实验动物
        1.2 主要试剂与仪器
            1.2.1 主要试剂
            1.2.2 主要仪器和设备
            1.2.3 实验试剂的配制
        1.3 研究方法
            1.3.1 ADMSCs的分离培养
            1.3.2 成脂成骨方向诱导
            1.3.3 流式细胞术检测ADMSCs表型
            1.3.4 Lentivirus-EGFP感染ADMSCs过程
            1.3.5 MTT法检测最佳感染后的ADMSCs增殖情况
            1.3.6 ADMSC/EGFP的纯化筛选
            1.3.7 统计学分析
    2 结果
        2.1 ADMSCs的形态学观察
        2.2 ADMSCs的表型测定
        2.3 成骨成脂诱导分化检测结果
        2.4 重组慢病毒感染ADMSCs最佳感染效率分析
        2.5 最佳MOI感染ADMSCs后的增殖能力
    3 讨论
第二部分 EGFP修饰的ADMSCs对顺铂诱导小鼠AKI的修复作用
    1 材料和方法
        1.1 实验动物
        1.2 主要试剂与仪器
            1.2.1 主要试剂
            1.2.2 主要仪器和设备
            1.2.3 实验试剂的配制
        1.3 研究方法
            1.3.1 动物模型建立和分组
            1.3.2 观察内容和检测指标
            1.3.3 统计学分析
    2 结果
        2.1 肾功能指标检测结果
        2.2 肾脏病理ATN评分
        2.3 荧光显微镜下观察移植的ADMSCs在肾脏的分布
        2.4 肾小管上皮细胞凋亡检测结果
        2.5 肾小管上皮细胞增殖检测结果
        2.6 凋亡调控基因Bcl-2、Bax在各组肾脏的表达及Bcl-2/Bax比值的变化
        2.7 ELISA法检测各组肾组织中TNF-α、MCP-1、IL-1β、IL-10、BMP-7、HGF的水平
    3 讨论
结论
参考文献
综述
    参考文献
附录：常见英文缩写
攻读学位期间发表文章情况
致谢
个人简历


【参考文献】：
期刊论文
[1]干细胞因子和粒细胞集落刺激因子动员自身骨髓干细胞治疗缺血再灌注肾损伤[J]. 毕凌云,郭金岗,张瑞霞,赵静丽,梁斌,赵德安,杨达胜.  中国组织工程研究. 2012(41)
[2]动员自体骨髓干细胞对大鼠急性肾小管坏死的治疗[J]. 毕凌云,杨达胜,梁斌,张瑞霞,白海涛.  中国中西医结合肾病杂志. 2012(08)
[3]骨髓间充质干细胞在急性肾损伤中的研究进展[J]. 刘红,俞小芳,丁小强.  中华肾脏病杂志. 2012 (07)
[4]携带绿色荧光蛋白基因慢病毒转染的大鼠骨髓间充质干细胞的干细胞特性检测[J]. 管小俊,宋琳,郭雪君,徐卫国.  诊断学理论与实践. 2011(06)
[5]对急性肾损伤分期的新认识[J]. 张凯悦,季大玺,龚德华.  中国血液净化. 2011(07)
[6]急性肾衰竭的诊断和治疗[J]. 杨达胜.  实用儿科临床杂志. 2005(05)



本文编号：3495910