Bruton酪氨酸激酶通过调控NLRP3影响高糖诱导骨髓来源巨噬细胞激活

发布时间：2021-11-23 18:48

　　背景与目的糖尿病肾病（DN）是糖尿病患者最严重的并发症之一,近年来研究表明炎症是DN最重要的病理学特征,而巨噬细胞向肾脏组织的侵入并激活可促进炎症反应。目前对于巨噬细胞活化并发挥病理作用的分子机制尚未完全明晰。Bruton酪氨酸激酶（Btk）,是一种非受体类酪氨酸激酶,属于Tec家族。它是体内细胞信号转导的主要信号酶之一,在B淋巴细胞、噬碱性粒细胞、单核细胞等髓系细胞均有表达,能催化多种底物蛋白质酪氨酸残基磷酸化。有研究证实其在炎症相关疾病中起到一定作用。炎症体家族是先天性免疫炎症应答的关键,NLRP3炎症小体最具代表性。Btk可调控NLRP3炎症小体的形成,因而我们假设Btk通过调控NLRP3炎症小体影响高糖环境下巨噬细胞的激活。本研究通过应用高糖刺激骨髓来源巨噬细胞及Btk基因敲除后,检测Btk及NLRP3炎症小体的激活水平,探讨高糖环境下巨噬细胞活化和促炎反应是否由Btk通过调控NLRP3炎症小体激活介导。方法1.实验小鼠（Btk基因敲除小鼠和C57BL/6J）BMDM的提取、培养。2.采用流式细胞仪检测BMDM纯度。3.CCK-8法评估Btk抑制剂PCI-32765(10

【文章来源】：安徽医科大学安徽省

【文章页数】：61 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

流式细胞术检测BMDM纯度及成熟度

注：与 C 组比，*P＜0.05图 2 CCK-8 法检测不同浓度 PCI-32765 对巨噬细胞的毒性Fig2 Toxicity of different concentrations of PCI-32765 to BMDM by CCK-8 HG 刺激下 Btk 抑制效果最佳的 PCI-32765 浓度达到最佳的实验条件,选择高糖刺激下 PCI-32765 最佳的干预浓得出的不影响巨噬细胞活性的浓度范围,选择 10-9,10-8,10-7, 10-6, 5 个 PCI-32765 浓度刺激 BMDM Western blot 结果显示,与 C 组相,Btk 蛋白表达水平明显升高(P<0.05);HG 刺激下给予 PCI-76325 干tk蛋白表达水平的降低呈浓度依赖性(P<0.05),并在浓度为10-6mm最高,故以此作为后续实验的干预浓度,见图 3

：与 C 组相比，*P＜0.05；与 HG 组相比，#P＜0.05；NS:无差异 3 Western blot 检测各组巨噬细胞 P-Btk、Btk 蛋白表达水平ig3 Expression of p-Btk、Btk protein determined by Western blot BMDM 向 M1 活化及 Btk 基因敲除的影响达于成熟的巨噬细胞中,iNOS 是 M1 型巨噬细胞特异性技术在共聚焦显微镜下观察各组巨噬细胞活化情况 结果,HG 刺激组 M1 型表型标志物 iNOS 荧光强度显 Btk 基因敲除可以荧光强度显著的减弱 与 HG 组相比制剂干预 iNOS 荧光强度减弱,高糖刺激下 Btk-/-基因敲强度 由此证明 HG 诱导能够促进 BMDM 向 M1 型巨噬5处理或Btk基因敲除使得M1 表型巨噬细胞显著减少,说

【参考文献】：
期刊论文
[1]CCL2/MCP-1在其相关疾病的机制研究[J]. 姜懿纳,陈乃宏.  中国药理学通报. 2016(12)



本文编号：3514454