CELL-SELEX筛选膀胱癌核酸适配体的细胞学研究

发布时间：2022-01-07 05:50

　　目的基于膀胱癌标志物的早期诊断和术后复发监测方法是目前的研究热点。文中利用CELL-SELEX技术筛选出可特异性识别膀胱癌细胞系（EJ、T24、BIU87）的核酸适配体。方法以人膀胱癌细胞系EJ、T24和BIU87为阳性质控细胞,以HCV29（人正常尿路上皮细胞系）、293T（人胚肾细胞系）、huh7（人肝癌细胞系）为阴性质控细胞,进行CELL-SELEX筛选。PCR上游引物5’端标记FITC,下游引物5’端标记Biotin,将每一轮次筛选得到的ssDNA作为模板进行PCR扩增、纯化。利用生物素-链亲和素磁珠分离法将PCR纯化产物进行分离后获得次级FITC-ssDNA用于下一轮次的筛选,流式细胞仪监测CELL-SELEX筛选进程。选取与膀胱癌细胞系EJ、T24和BIU87结合率最高轮次的ssDNA文库进行PCR扩增、产物纯化、分子克隆和测序;根据测序结果,利用Dnaman软件模拟核酸适配体的二级结构。体外合成FITC标记的适配体,流式细胞仪检测适配体与EJ、T24和BIU87的结合率。结果随着CELL-SELEX流程的推进,FITC-ssDNA与EJ、T24和BIU87细胞的结合率逐渐... 

【文章来源】：医学研究生学报. 2020,33(07)北大核心

【文章页数】：7 页

【部分图文】：

阴性筛选流式结果

适配体验证后流式结果

阳性筛选流式结果


本文编号：3573943