高糖环境下大鼠肾小球系膜细胞Toll样受体4与血管紧张素Ⅱ的对话关系及其天然免疫应答炎症效应

发布时间：2022-01-08 02:21

　　目的:探讨高糖和血管紧张素Ⅱ刺激下肾小球系膜细胞TLR4及其信号通路中下游因子My D88、NF-κB以及炎性因子的表达变化,并运用TLR4 RNA干扰技术、血管紧张素受体拮抗剂（ARB类药物）干预高糖及血管紧张素Ⅱ（10-7 M）刺激后的的系膜细胞,分析TLR4及其下游信号分子的表达改变,论证高糖环境下AngⅡ与TLR4的对话关系及其天然免疫炎症效应,以阐明TLR4信号通路在DN发病机制中的具体作用。方法:常规培养细胞后将细胞分4组:1、低糖组2、高糖组3、血管紧张素Ⅱ组4、甘露醇组,24小时后提取细胞总蛋白。western blot检测TLR4、My D88及NF-k B蛋白表达水平的变化,分析高渗状态对TLR4/My D88信号通路的影响。设计3对针对大鼠TLR4基因的特异性si RNA片段以及带有绿色荧光的阴性对照。筛选出转染效率最高的si RNA,用于后续试验,将正常培养的细胞分为:第一组:1、低糖组2、高糖组3、高糖+血管紧张素Ⅱ组4、高糖+ARB组5、高糖+TLR4si RNA组6、高糖+Sc Si RNA组。第二组:1、低糖组2、血管紧张素Ⅱ组3、高糖+血管紧张素Ⅱ组4... 

【文章来源】：南昌大学江西省 211工程院校

【文章页数】：54 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

肾小球系膜细胞

E果对比图（荧光显微镜×200）：A：25nmol/L B：50nmol/L CE：125nmol/LPCR筛选沉默效果最佳的siRNA胞，血管紧张素Ⅱ干预 24 小时后分别转染 ScSiRNA、NA-3，提取细胞总 RNA，检测各组细胞 TLR4、MyD8筛选出沉默效果最佳的 siRNA 进行后续实验，结果如

E 转染效果对比图（荧光显微镜×200）：A：25nmol/L B：50nmol/L C：75nmol/L E：125nmol/L光定量PCR筛选沉默效果最佳的siRNA培养细胞，血管紧张素Ⅱ干预 24 小时后分别转染 ScSiRNA、siRN2 及 siRNA-3，提取细胞总 RNA，检测各组细胞 TLR4、MyD88 m达量，筛选出沉默效果最佳的 siRNA 进行后续实验，结果如下图:

【参考文献】：
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本文编号：3575713