MiR-26ab通过靶基因PTEN调控雄激素信号通路抑制前列腺癌细胞增殖的效应与机制研究

发布时间：2017-05-12 00:14

  本文关键词：MiR-26ab通过靶基因PTEN调控雄激素信号通路抑制前列腺癌细胞增殖的效应与机制研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：第一部分:通过临床样本miRNA表达差异筛选出靶标miRNA目的:探究前列腺良性肥大(prostatic hyperplasia,PH)临床样本、癌旁组织(Pericarcinoma,PC)临床样本、良性前列腺肥大(Benign prostatic hyperplasia,BPH)临床样本和去势抵抗性前列腺癌(castration-resistant prostate cancer,CRPC)临床样本中miRNA的表达的差异,并筛选出目标miRNA。方法:提取6例前列腺良性增生样本和18例原发性前列腺癌标本,以及10例前列腺增生样本和22例CRPC肿瘤样本中的总RNA。使用miRNA微阵列v2芯片对总RNA中的miRNA进行分析,每个样本中的miRNA用杂交试剂盒表达,分析表达后miRNA之间显著差异,筛选出靶标miRNA。结果:检测到723个人miRNA,其中有339个miRNA(47%)有显著差异,其中,在CRPC中,mi RNA-32,mi RNA-590-5p和mi RNA-21有机显著的过度表达,而miRNA-99a,mi RNA-221和miRNA-26ab有显著的抑制。miRNA-26ab,miRNA-21和miRNA-221在CRPC中发现有特异性表达但在PC中却没有显著差异。结论:由于miRNA-26ab,miRNA-21和miRNA-221在CRPC中发现有特异性表达而在PC中却没有显著差异,所以在此可以确定miRNA-26ab,miRNA-21和miRNA-221与CRPC表达有关联。因为mi RNA-21和miRNA-221之前已显示与雄性激素调节相关并且在CRPC中也有所涉及。最终,miRNA-26ab被选取用于进一步大的研究。第二部分:对mi RNA的鉴定以及在AR信号通路中的作用机制的初步探讨目的:通过转染LNCa P细胞株,探究mi RNA在前列腺癌细胞生长和细胞周期中的作用,以及确定mi RNA-26ab的靶基因,最后明确mi RNA与AR信号通路之间的相互关系。方法:①首先对mi RNA-26ab转染的LNCa P细胞运用荧光检测,之后用流式细胞仪分析检测生长周期各阶段细胞数量。②第二步,将mi RNA-26ab与PTEN基因片段结合,并使用荧光定量PCR来定量,mi RNA-26ab-PTEN在克隆到载体p SGG-3UTR质粒上,并使用荧光素酶法检测表达情况。③最后利用western-blot技术检测mi RNA-26ab对AR信号通路的影响。结果:①mi RNA-26ab的mi RNA前体被转染进入亲代LNCa P细胞。mi RNA-26ab以时间依赖方式显著的减少了LNCa P细胞的生长率(P0.05)。②前体mi RNA-26ab转染的LNCa P细胞被用于m RNA微阵列分析结果,结果五个基因(PTEN,FBN1,REBB,TPM1,E2F1)显示出大约5倍数的变化。其中,PTEN被预测为mi RNA-26ab功能上最有希望的目标基因并且在前体mi RNA-26ab转染的LNCa P细胞中,PTEN蛋白的表达同样的增加。同时荧光素酶结果明确的显示出PTEN受mi RNA-26ab的直接调控。③在LNCa P细胞中,mi RNA-26ab可阻断DHT诱导的PSA表达以及PSA-LUC受体基因活性,但mi RNA-26ab却没有改变AR的表达,说明前体mi RNA-26ab是直接减少AR信号通路靶基因的转录和表达。
【关键词】：CRPC miRNAs mi RNA-26ab LNCa P细胞株 前列腺癌 PTEN基因
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.25

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本文编号：358382