BRG1调控自噬对终末期肾脏病血管钙化的作用机制

发布时间：2022-01-13 23:08

　　研究目的:血管钙化（Vascular calcification,VC）是慢性肾脏病（CKD）患者常见的临床表现之一。但是,目前尚无可靠的早期生物标记物,这给血管钙化的防治带来了困难。我们通过Label-free蛋白质组学在高磷诱导的大鼠主动脉平滑肌细胞（RASMCs）模型中筛选出具有显著差异表达的分子BRG1。BRG1又叫Smarca4,是SWI/SNF复合物的核心催化亚基,它通过改变基因周围的染色质结构来调节这些基因的转录活性,并调控细胞周期、增殖和分化,但其在血管钙化中的作用尚不清楚。鉴于此,本研究将观测BRG1在血管钙化中的表型,着重阐释BRG1影响血管钙化的可能机制,为寻找血管钙化早期生物标记物打下基础。研究方法:1.构建高磷诱导的RASMCs钙化模型,用Von-Kossa染色、RT-PCR和Western blot实验筛选最佳的建模条件。2.对正常和钙化RASMCs进行Label-free蛋白质组学检测,筛选具有差异表达的蛋白质。3.对BRG1的表达进行体内验证。构建终末期肾脏病（ESRD）血管钙化动物模型,并收集临床ESRD血管钙化患者和正常人的动脉血管组织,RT-PCR... 

【文章来源】：电子科技大学四川省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

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【学位级别】：硕士

【部分图文】：

高磷成功诱导大鼠主动脉平滑肌细胞发生钙化

第二章BRG1在血管钙化中的作用23(a)(b)(c)图2-2Label-free蛋白质组学筛选钙化指标。(a)正常RASMCs和钙化RASMCs的Von-Kossa染色；(b)正常RASMCs和钙化10天RASMCs中OPN、Runx2和Rankl的WesternBlot图像；(c)正常RASMCs和钙化10天RASMCs中FGF23、Klotho和iPTH的mRNA表达水平因此，我们对正常RASMCs和钙化RASMCs进行蛋白质组学实验，以筛选出对血管钙化具有调控作用的蛋白分子。在聚类分析结果中，我们共对113个重要蛋白质进行了分组，在钙化组，有57个蛋白分子表达下调（蓝色部分），56个蛋白分子表达上调（红色部分）。因筛选出的蛋白质数量较多，所以图中没有对蛋白质的名称进行标注。缺失值以“-”表示。Control组和CAL组分别有三组重复样品（见图2-3）。其中，差异倍数>1.2（p<0.05）或<-1.2（p<0.05）被认为是有意义的差异表达蛋白。图中一个点代表一个蛋白分子。X轴表示差异变化倍数（FoldChange,FC），Y轴表示统计学意义（p值的-log10）。水平虚线以下为无意义蛋白质，以上为有意义蛋白质。两个垂直虚线表示下/上调的蛋白质（见图2-4）。在所有上调的差异蛋白分子中，BRG1的差异表达倍数为2.72（p＝0.01），高于

电子科技大学硕士学位论文24上调蛋白分子的平均差异表达倍数2.0。对这113个差异蛋白分子进行了GO分析。生物信息学分析表明，这些蛋白质主要参与胎盘血管的发育和肝脏的再生，主要的分子功能是细胞粘附分子的结合（见图2-5（a））。接着，使用STRINGdb数据库搜索上面筛选出的蛋白质，从而观察差异蛋白分子之间的相互作用。包括直接（物理）作用和间接（功能）作用。该结果主要源于计算预测、生物之间的知识转移以及其他（主要）数据库的交互作用。每条彩色线代表不同的相互作用，红色表示基因融合，绿色表示基因邻域，蓝色表示共作用，紫色表示经实验确定，浅蓝色表示经数据库筛选，黑色表示共表达，浅紫色表示蛋白质同源。红色背景为蛋白质表达上调，绿色背景为蛋白质表达下调。如图2-5（b）所示，主要展示了在钙化组中上调的BRG1与其他蛋白质相互作用的结果。图2-3CAL组与Control组中差异表达蛋白质的聚类热图

【参考文献】：
期刊论文
[1]线粒体自噬的研究进展[J]. 胡磊,戴海明.  中国细胞生物学学报. 2018(04)



本文编号：3587309