PLCε通过PKCα/β/TBX3/E-cadherin信号通路调节膀胱癌细胞的侵袭和迁移
发布时间：2022-01-20 08:46
第一部分PLCε shRNA通过PKCα/β/TBX3/E-cadherin信号通路抑制膀胱癌细胞的侵袭和迁移目的：体外实验研究PLC调节膀胱癌细胞侵袭和迁移的分子机制。方法：各处理因素作用于膀胱癌细胞株T24、BIU-87细胞后，采用划痕，transwell迁移、侵袭实验检测细胞的迁移、侵袭能力；QRT-PCR检测TBX3，E-cadherin的mRNA表达水平；Western blot检测PLC，PKC，PKCβ，p-PKC，p-PKCβ, TBX3和E-cadherin的蛋白表达水平；IHC检测膀胱癌组织中PLC，PKC，PKCβ的蛋白表达水平。结果：划痕，transwell迁移、侵袭实验显示：Ad-shPLC能够抑制膀胱癌细胞的迁移、侵袭能力。Western blot结果显示Ad-shPLC使PKC、PKCβ在细胞膜的分布减少，降低PKC、PKCβ的磷酸化水平。Western blot和IHC结果显示：PLC高表达膀胱癌组织与PLC低表达的膀胱癌组织相比较，PKC、PKCβ的磷酸化水平及在细胞膜的表达升高。Western blot和QRT-PCR结果显示：Ad-shPLC能够抑...
【文章来源】：重庆医科大学重庆市
【文章页数】：65 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
下调PLCε的表达抑制PKCα、PKCβ的活化及PKCα、PKCβ参与PLCε介导的细胞迁移、侵袭能力
重庆医科大学硕士研究生学位论文35图1.3. 下调PLCε的表达抑制TBX3的表达和增加E-cadherin的表达。a）细胞感染Ad-HK和 Ad-shPLCε 48h后,提取总蛋白，western blot检测TBX3, E-cadherin 蛋白表达;b）同样条件下，提取细胞总RNA，QRT-PCR检测TBX3, E-cadherin的mRNA表达水平并与β-actin做比对做柱状图。*P< 0.05, **P<0.01.Fig1.3. Down-regulation of PLCε repressed TBX3 expression and increased E-cadherinexpression. a) Cells were treated with Ad-HK and Ad-shPLCε, follow by incubated for 48h, theprotein expressions of TBX3 and E-cadherin were measured by using western blot; b) Underthe same condition, total RNA was extracted and qRT-PCR was performed onreverse-transcribed RNA using primers specific toTBX3, E-cadherin and mRNA levels werenormalized to β-actin. *P < 0.05, **P<0.01.2.4 PLCε通过TBX3介导E-cadherin的表达如图1.4所示，细胞转染pGenesil-shTBX3后，能够在mRNA及蛋白水平下调TBX3的表达及抑制细胞的迁移、侵袭能力，并且当pGenesil-shTBX3与Ad-shPLC 共同处理细胞后，与Ad-shPLC 处理组比较
图1.5. Ad-shPLCε联合Go6976处理对TBX3, E-cadherin表达的合成效应。a）细胞先予以Ad-shPLCε处理，后予Go6976处理4小时，提取总蛋白，western blot检测TBX3, E-cadherin的蛋白表达。**P<0.01,*P<0.05与空白组比较; #P< 0.05与 Ad-shPLCε处理组比较。Fig1.5. Combined treatment of Go6976 with Ad-shPLCε exhibited synergistic effects onTBX3 and E-cadherin expression. a) Cells were treated with Ad-shPLCε, followed by Go6976treatment for 4h, western blot was used to evaluate the protein expression of TBX3 andE-cadherin. **P<0.01,*P<0.05 vs blank control; #P< 0.05 vs Ad-shPLCε.2.6. PLCε通过依赖PKCα/β的方式调节TBX3，E-cadherin的表达如图1.6所示，细胞予以PKC激活剂PMA和Ad-shPLC 处理后，能够逆转shPLC对TBX3和E-cadherin的表达影响，且具有统计学意义。
【参考文献】：
期刊论文
[1]磷脂酶Cε基因在膀胱移行细胞癌中表达及其临床意义[J]. 郭永灿,罗春丽,蔡晓钟,吴小候,蒲军. 临床检验杂志. 2008(01)
本文编号：3598524
【文章来源】：重庆医科大学重庆市
【文章页数】：65 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
下调PLCε的表达抑制PKCα、PKCβ的活化及PKCα、PKCβ参与PLCε介导的细胞迁移、侵袭能力
重庆医科大学硕士研究生学位论文35图1.3. 下调PLCε的表达抑制TBX3的表达和增加E-cadherin的表达。a）细胞感染Ad-HK和 Ad-shPLCε 48h后,提取总蛋白，western blot检测TBX3, E-cadherin 蛋白表达;b）同样条件下，提取细胞总RNA，QRT-PCR检测TBX3, E-cadherin的mRNA表达水平并与β-actin做比对做柱状图。*P< 0.05, **P<0.01.Fig1.3. Down-regulation of PLCε repressed TBX3 expression and increased E-cadherinexpression. a) Cells were treated with Ad-HK and Ad-shPLCε, follow by incubated for 48h, theprotein expressions of TBX3 and E-cadherin were measured by using western blot; b) Underthe same condition, total RNA was extracted and qRT-PCR was performed onreverse-transcribed RNA using primers specific toTBX3, E-cadherin and mRNA levels werenormalized to β-actin. *P < 0.05, **P<0.01.2.4 PLCε通过TBX3介导E-cadherin的表达如图1.4所示，细胞转染pGenesil-shTBX3后，能够在mRNA及蛋白水平下调TBX3的表达及抑制细胞的迁移、侵袭能力，并且当pGenesil-shTBX3与Ad-shPLC 共同处理细胞后，与Ad-shPLC 处理组比较
图1.5. Ad-shPLCε联合Go6976处理对TBX3, E-cadherin表达的合成效应。a）细胞先予以Ad-shPLCε处理，后予Go6976处理4小时，提取总蛋白，western blot检测TBX3, E-cadherin的蛋白表达。**P<0.01,*P<0.05与空白组比较; #P< 0.05与 Ad-shPLCε处理组比较。Fig1.5. Combined treatment of Go6976 with Ad-shPLCε exhibited synergistic effects onTBX3 and E-cadherin expression. a) Cells were treated with Ad-shPLCε, followed by Go6976treatment for 4h, western blot was used to evaluate the protein expression of TBX3 andE-cadherin. **P<0.01,*P<0.05 vs blank control; #P< 0.05 vs Ad-shPLCε.2.6. PLCε通过依赖PKCα/β的方式调节TBX3，E-cadherin的表达如图1.6所示，细胞予以PKC激活剂PMA和Ad-shPLC 处理后，能够逆转shPLC对TBX3和E-cadherin的表达影响，且具有统计学意义。
【参考文献】：
期刊论文
[1]磷脂酶Cε基因在膀胱移行细胞癌中表达及其临床意义[J]. 郭永灿,罗春丽,蔡晓钟,吴小候,蒲军. 临床检验杂志. 2008(01)
本文编号：3598524
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