硒蛋白T在顺铂诱导的急性肾损伤中的作用及其机制

发布时间：2022-01-23 17:04

　　目的:急性肾损伤（acute kidney injury,AKI）是一种临床上常见的、由多因素引起的急性综合征。硒蛋白家族因抗氧化的作用而被人们熟知,硒蛋白T（selenoprotein T,SelT）则是其中一员,但其具体生物学功能及其机制尚不清楚。因此,这里我们主要探究SelT是否通过调节氧化应激及细胞凋亡在顺铂诱导的AKI中发挥重要作用。方法:（1）取人、大鼠、小鼠的正常肾脏组织行免疫组织化学法（immunohistochemistry,IHC）、免疫印迹法（western-blot,WB）检测SelT的分布与表达;提取体外培养人、大鼠的肾小管上皮细胞总蛋白行WB检测SelT的表达情况。（2）C57BL/6小鼠腹腔注射顺铂（25mg/ml）构建AKI模型,收集血标本检测肌酐和尿素氮含量评估造模是否成功,取肾组织行WB、IHC检测SelT、NGAL、Caspase3的表达情况。体外培养NRK-52e细胞给予顺铂（20μM）刺激,提取细胞总蛋白行WB检测SelT、NGAL、Caspase3的蛋白水平变化,并收集细胞行流式细胞术检测凋亡细胞比例。（3）构建SelT-RNAi慢病毒载体敲... 

【文章来源】：华中科技大学湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

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【学位级别】：硕士

【部分图文】：

在顺铂诱导的体内、外急性肾损伤模型中，SelT表达下调A.取对照组、模型组（1-4d）C57BL/6小鼠的血清，进行肌酐、尿素氮的检测，判断模型是否成功

- 41 -图 4. 在 NRK-52e 细胞中敲低 SelT 基因表达增加细胞凋亡A. RT-PCR 检测发现：Scra 组、shSelT 组细胞中 SelT mRNA 水平的统计图。n=5，Scra：阴性病毒处理组，shSelT：SelT 慢病毒处理组，与 Scra 组细胞相比，***P<0.001

图 5. 在 NRK-52e 细胞中敲低 SelT 基因表达增加氧化应激A. 代表性 WB 胶片显示：Scra 组、shSelT 组 NRK-52e 细胞给予顺铂刺激 24h后，细胞中 HO-1 的表达情况。B. Scra 组、shSelT 组 NRK-52e 细胞给予顺铂刺激24h后，细胞中HO-1表达情况的WB统计图。n=5，与Scra组细胞相比，*P<0.05有统计学差异；与 shSelT 组细胞相比，&P<0.05 有统计学差异；与 Scra+Cisplatin24hour 组细胞相比，#P<0.05 有统计学差异。C. Scra 组、shSelT 组 NRK-52e 细胞给予顺铂刺激（1-6h）后，细胞内 SOD、MDA、NO 含量变化的统计图。n=5，与 Scra 组（Ctrl）细胞相比，*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001 有统计学差异；与shSelT 组（Ctrl）细胞相比，&P<0.05，&&&P<0.001 有统计学差异；与 Scra 组（Ctrl或 Cisplatin 24hour 处理）细胞相比，#P<0.05 有统计学差异。D. Scra 组、shSelT组 NRK-52e 细胞给予顺铂刺激 24h 后，细胞内 ROS 含量变化的免疫荧光图。


本文编号：3604792