OY-TES-1的表达及其抗体对精子功能影响的研究
发布时间：2022-01-24 05:52
第一部分OY-TES-1-N端、-C端截短蛋白抗体的制备目的:制备抗OY-TES-1-N端、-C端截短蛋白多克隆抗体。方法:（1）利用前期研究构建的OY-TES-1-N端（A6-R273）、-C端（S291-G543）表达载体,扩增含表达载体的感受态细胞,IPTG诱导截短蛋白表达。（2）用Amylose Resin亲和层析分离纯化截短蛋白。（3）截短蛋白免疫新西兰家兔诱导体液免疫。（4）重组蛋白A亲和层析分离纯化兔血清。（5）ELISA和Western Blot检测兔免疫血清效价和特异性。结果:（1）表达OY-TES-1-N和OY-TES-1-C截短蛋白。（2）亲和层析得到纯度较高的截短蛋白。（3）最后一次追加免疫后血清抗体滴度高于1:128000。（4）亲和层析得到纯度较高的抗OY-TES-1-N和OY-TES-1-C截短蛋白IgG。（5）两种多克隆抗体效价均高于1:128000,且能与融合蛋白发生特异性识别与结合。结论:制备的抗OY-TES-1-N/-C截短蛋白多克隆抗体具有较高的特异性和灵敏度。第二部分OY-TES-1蛋白在正常组织中的表达目的:了解OY-TES-1蛋白在人胎儿组...
【文章来源】：广西医科大学广西壮族自治区
【文章页数】：170 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
的蛋白的表达Figure1-1Theexpressionoftargetproteins
图 1-1 的蛋白的表达Figure 1-1 The expression of target proteinstein mark； 2，pMAL-C2 空质粒未经诱导的表达； 3，pMAL-C2 空质粒的诱导表达；粒未经诱导的表达； 5， 装质粒的诱导表达。蛋白的纯化 12％ SDS-PAGE 电泳染色，可见粗提液经 Amylose-resin 亲和后，70KDa、40KDa 附近可见两条明显的条带，与目的蛋白（74ka）及 MBP（45KDa）的理论分子量大致相符（图 1-2）。
图 1-3 的蛋白的抗原性Figure 1-3 The antigenicity of the target protein测测试剂盒说明书，做标准曲线（图用少量 PBS 溶解目的蛋白冻干粉 OD 值代入标准曲线计算浓度（表
【参考文献】：
期刊论文
[1]精子表面的GPI锚定蛋白[J]. 邹美,胡双纲,胡建民. 生殖与避孕. 2008(01)
[2]小鼠精子3种活体染色法的比较分析[J]. 陈秋菊,朱伟杰. 中国优生与遗传杂志. 2003(03)
本文编号：3605988
【文章来源】：广西医科大学广西壮族自治区
【文章页数】：170 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
的蛋白的表达Figure1-1Theexpressionoftargetproteins
图 1-1 的蛋白的表达Figure 1-1 The expression of target proteinstein mark； 2，pMAL-C2 空质粒未经诱导的表达； 3，pMAL-C2 空质粒的诱导表达；粒未经诱导的表达； 5， 装质粒的诱导表达。蛋白的纯化 12％ SDS-PAGE 电泳染色，可见粗提液经 Amylose-resin 亲和后，70KDa、40KDa 附近可见两条明显的条带，与目的蛋白（74ka）及 MBP（45KDa）的理论分子量大致相符（图 1-2）。
图 1-3 的蛋白的抗原性Figure 1-3 The antigenicity of the target protein测测试剂盒说明书，做标准曲线（图用少量 PBS 溶解目的蛋白冻干粉 OD 值代入标准曲线计算浓度（表
【参考文献】：
期刊论文
[1]精子表面的GPI锚定蛋白[J]. 邹美,胡双纲,胡建民. 生殖与避孕. 2008(01)
[2]小鼠精子3种活体染色法的比较分析[J]. 陈秋菊,朱伟杰. 中国优生与遗传杂志. 2003(03)
本文编号：3605988
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