B7-H3调节髓源性抑制细胞凋亡促进小鼠前列腺癌进展的实验研究

发布时间：2022-01-25 02:56

　　目的：本课题利用自行构建的B7-H3高表达的小鼠前列腺癌RM-1（RM-1-B7-H3）及对照细胞株（RM-1-mock），通过体内、体外实验分析B7-H3在小鼠前列腺癌进展中的免疫作用机制。方法：检索小鼠B7H3的核苷酸序列，合成小鼠B7H3基因片段，转入目的载体，利用Gateway Technology构建B7H3基因高表达的质粒载体，脂质体转染获得稳定RM-1-B7-H3转基因细胞以及RM-1-mock为对照细胞。应用荧光显微镜下观察转染绿色荧光蛋白表达、RT-PCR检测mRNA表达的变化以及流式细胞仪技术检测分析，鉴定RM-1-B7-H3转基因细胞的效率及稳定性。在此基础上，体外实验比较分析RM-1-B7-H3转基因细胞以及RM-1-mock细胞增值能力；自C57BL/6小鼠皮下接种RM-1-B7-H3转基因细胞以及RM-1-mock细胞，观察体内成瘤情况；分离不同实验组荷瘤小鼠肿瘤组织及脾脏组织，流式分析技术检测各组间Gr-1+CD11b+MDSC表达水平，并以PI评估MDSC凋亡情况；离体实验中，自健康C57BL/6小鼠脾脏分离纯化Gr-1+CD11b+MDSC，并分别与R... 

【文章来源】：苏州大学江苏省 211工程院校

【文章页数】：99 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

载体结构示意图

图 1-3 pDown- B7H3 PCR 检测结果Fig1-3 pDown- B7H3 PCR detection resultM: 1kb DNA MarkerLane1～Lane8: pDown- B7H3 ①～⑧号克隆PCR 鉴定引物：pUpDo-flank-F：CGGCCAGTCTTAAGCTCGGGpUpDo-flank-R：AATACGACTCACTATAGGGGA2.测序鉴定实验序列：测序引物：pUpDo-flank-F：CGGCCAGTCTTAAGCTCGGGpUpDo-flank-R：AATACGACTCACTATAGGGGA结论：PCR 鉴定条带理论大小为 1200bp，与目的条带大小相符的

pDown-B7H3测序峰图

【参考文献】：
期刊论文
[1]B7-H3单抗交联作用对Mo-DC体外生物学功能的影响[J]. 朱一蓓,张光波,周迎会,李文香,胡益洲,张学光.  现代免疫学. 2008(02)
[2]前列腺癌发病趋势的回顾和展望[J]. 叶定伟,李长岭.  中国癌症杂志. 2007(03)
[3]Relationship between co-stimulatory molecule B7-H3 expression and gastric carcinoma histology and prognosis[J]. Chang-Ping Wu Jing-Ting Jiang Min Tan Jie-Min Zhao,The Third Affiliated Hospital of Suzhou University,Changzhou 213003,Jiangsu Province,ChinaYi-Bei Zhu Kuan-Feng Xu Guang-Bo Zhang Xue-Guang Zhang,Institute of Biotechnology,Suzhou University,Key Laboratory of Clinical Immunology of Jiangsu Province,Suzhou 215007,Jiangsu Province,China.  World Journal of Gastroenterology. 2006(03)
[4]B7-H3:Another Molecule Marker for Mo-DCs?[J]. Guangbo Zhang~(1,2) Qiuming Dong~2 Ying Xu~2 Gehua Yu~2 Xueguang Zhang~(1,2,3) ~1Clinical Immunology Laboratory of Jiangsu Province,Suzhou University No.1 Affiliated Hospital,96 Shizi Street,Suzhou 215006,China;~2Biotechnology Institute,Suzhou University,48 Renmin Road,Suzhou 215007,China;.  Cellular & Molecular Immunology. 2005(04)
[5]Human Recombinant B7-H3 Expressed in E.colt Enhances T Lymphocyte Proliferation and IL-10 Secretion in Vitro[J]. Guang-Bo ZHANG,Yong-Jing CHEN,Qin SHI,Hong-Bing MA,Yan GE,Qin WANG,Zhi JIANG,Ying XU,and Xue -Guang ZHANGInstitute of Biotechnology Soochow University Key Laboratory of Clinical Immunology of Jiangsu Province Suxhou 215007,China.  Acta Biochimica et Biophysica Sinica. 2004(06)
[6]我国前列腺癌的研究现状[J]. 孙颖浩.  中华泌尿外科杂志. 2004(02)
[7]Mass screening of 12027 elderly men for prostate carcinoma by measuring serum prostate specific antigen[J]. 张海峰,王洪亮,许宁,李胜文,计国义,李晓萌,潘玉琢,张灵,赵雪俭,高洪文.  Chinese Medical Journal. 2004(01)



本文编号：3607773