肾细胞癌中WNK2基因甲基化状态与mRNA表达的研究

发布时间：2017-05-13 01:04

  本文关键词：肾细胞癌中WNK2基因甲基化状态与mRNA表达的研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:肾细胞癌(Renal Cell Carcinoma,RCC)是泌尿系统中最常见的恶性肿瘤之一,其恶性程度较高,易发生转移,近年来其发病率仍处于上升趋势。目前,RCC的发病机制还未完全清楚,流行病学调查研究显示:吸烟、肥胖、高血压、糖尿病、遗传等因素可能与肾细胞癌的发生有关。抑癌基因的失活是恶性肿瘤发生的重要原因之一。随着表观遗传学的不断发展,目前发现多种表观遗传学修饰方式,主要包括DNA甲基化、组蛋白修饰、染色质重塑和RNA干扰等,其中DNA甲基化是最重要的修饰方式之一。许多观点认为,抑癌基因的失活与DNA启动子区异常甲基化密切相关。研究发现,几乎所有蛋白激酶在激酶结构域第2亚单位有一个高度保守的赖氨酸,但在WNK激酶中缺失此赖氨酸,因此得名With no K kinase(K代表赖氨酸),缩写为WNK。WNK2是WNK家族成员之一,位于人类染色体9q22.31,是新发现的一个抑癌基因。WNK2基因主要通过表皮生长因子(Epidermal growth factor,EGF)介导的Ras/Raf/丝裂原激活蛋白激酶的激酶(mitogen-activated protein kinase kinase,MEK)/细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases,ERK)信号传导通路和Rac/p21活化激酶(p21 activated kinase,PAK)信号传导通路之间的串话机制来调节细胞周期。最初在神经胶质瘤中发现WNK2基因启动子区高甲基化导致其表达沉默,随后在脑膜瘤、胰腺导管腺癌中也发现了WNK2基因启动子区的高甲基化。但是,WNK2基因与RCC之间的相关研究还未见报道。本课题以RCC组织、癌旁组织及正常肾组织为标本,研究WNK2基因启动子区的甲基化状态及m RNA表达水平,同时分析它们与临床数据之间的关系,探讨WNK2基因在RCC发生及发展中的作用,目地为RCC的病因、临床诊断和治疗提供新的思路。方法:1 WNK2基因启动子区甲基化状态检测:应用甲基化特异性聚合酶链式反应(Methylation Specific PCR,MSP)法检测58例RCC组织及相对应的癌旁组织和正常肾组织中WNK2基因的甲基化状态,并分析WNK2基因的异常甲基化在RCC发生、发展中的作用以及与临床数据间的关系。2 WNK2基因的m RNA相对表达量检测:采用反转录聚合酶链式反应(Reverse Transcriptase-PCR,RT-PCR)法检测WNK2基因m RNA在58例RCC组织及相对应的癌旁组织和正常肾组织中的相对表达量,并分析在RCC组织中WNK2基因m RNA相对表达量和临床数据间的关系。3采用统计学软件包SPSS20.0对实验数据进行分析。结果:1 RCC组织中WNK2基因甲基化状态RCC组织中WNK2基因甲基化状态有三种:即完全甲基化、半甲基化、完全非甲基化。2 RCC组织、癌旁组织和正常肾组织中WNK2基因甲基化状态及与临床资料之间的关系2.1 RCC组织、癌旁组织和正常肾组织中WNK2基因启动子区的甲基化状态及比较在58例RCC组织、58例癌旁组织和58例正常肾组织中WNK2基因启动子区甲基化阳性率分别为65.5%(38/58),34.4%(20/58),10.3%(6/58),三组间存在明显差异(X2=38.161,P=0.000)。RCC组织的甲基化阳性率明显高于癌旁组织(X2=11.172,P=0.001)及正常组织(X2=37.495,P=0.000)。2.2 RCC组织中WNK2基因启动子区甲基化状态在不同临床资料间的比较WNK2基因启动子区甲基化状态在性别(P=0.820)、年龄(P=0.134)、分期(P=1.000)、肿瘤大小(P=0.718)这些不同临床资料之间的差别无统计学意义(P均大于0.05)。3 58例RCC组织、58例癌旁组织和58例正常肾组织中WNK2基因m RNA的相对表达量,以及RCC组织中WNK2基因m RNA相对表达量与临床资料之间的关系3.1在58例RCC组织、58例癌旁组织和58例正常肾组织中WNK2基因相对表达量分别为0.54±0.03、0.66±0.05、0.68±0.03,经统计学分析,三组之间有显著差异(P0.05)。WNK2基因m RNA在RCC组织中的相对表达量明显低于癌旁组织(P0.05)及正常肾组织(P0.05)。3.2 WNK2基因的m RNA相对表达量与性别(P=0.142)、年龄(P=0.217)、肿瘤大小(P=0.145)这些不同临床资料之间的差别无统计学意义(P均大于0.05)。4在RCC组织中,WNK2基因m RNA的相对表达量在甲基化阳性病例中为0.52±0.04低于甲基化阴性病例中m RNA的相对表达量0.57±0.02,P0.05,差异有统计学意义。结论:1在正常肾组织、癌旁组织和RCC组织中,WNK2启动子区甲基化阳性率呈升高趋势,提示WNK2基因启动子区的异常甲基化可能参与RCC的发生。2在正常肾组织、癌旁组织和RCC组织中,WNK2基因m RNA相对表达量呈下降趋势,提示WNK2基因m RNA的表达下调可能参与RCC的形成。3在RCC组织中,甲基化阳性组中WNK2基因m RNA的相对表达量低于甲基化阴性组中m RNA的相对表达量,并且差异有统计学意义,提示WNK2基因启动子区高甲基化可能是导致其m RNA表达的降低的原因之一。
【关键词】：肾细胞癌 WNK2 甲基化 表达 肿瘤发生机制 抑癌基因
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.11
【目录】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-11
• 英文缩写11-12
• 前言12-13
• 材料与方法13-22
• 结果22-24
• 附图24-25
• 附表25-28
• 讨论28-33
• 结论33-34
• 参考文献34-37
• 综述 抑癌基因WNK2 与恶性肿瘤的研究进展37-48
• 参考文献44-48
• 致谢48-49
• 个人简历49

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 杨建树;李健宁;徐忠法;;Rac/PAK信号通路与肿瘤的关系及其在结直肠癌中的研究进展[J];中华临床医师杂志(电子版);2014年01期

  本文关键词：肾细胞癌中WNK2基因甲基化状态与mRNA表达的研究，，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：361224