PLCε通过GLS/p-mTOR途径促进膀胱癌细胞T24生存

发布时间：2022-07-14 17:49

　　谷氨酰胺对于细胞的代谢和生长十分重要,也是血液中含量最丰富的氨基酸,且肿瘤的代谢特征之一就是谷氨酰胺成瘾。该研究探讨磷脂酰肌醇特异性磷脂酶PLC epsilon（phospholipase C epsilon,PLCε）是否通过谷氨酰胺酶（glutaminase,GLS）,调节膀胱癌细胞T24自噬,促进膀胱癌细胞生存。首先通过数据库Su Multi-cancer Statistics、Sanchez-Carbayo Bladder 2和细胞实验分析PLCε在膀胱癌中表达情况。结果表明,PLCε在膀胱癌中高表达。并通过LV-shPLCε转染膀胱癌细胞T24后,q-PCR和Western blot检测PLCε在膀胱癌细胞T24中的表达情况以及对凋亡和自噬的影响,同时免疫荧光检测细胞内自噬斑点（LC3）的变化。结果显示,敲低PLCε后,Caspase-3/Caspase-8/LC3-Ⅱ表达增加,p62表达降低;流式细胞术结果显示凋亡率增高;免疫荧光发现自噬斑点LC3均增多;GLS和p-mTOR的表达受到抑制。在shPLCε组中添加过表达GLS质粒后,p-mTOR和p62表达增加,LC3-Ⅱ表... 

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 细胞株
    1.2 病人样本
    1.3 慢病毒
    1.4 主要试剂
    1.5 实验方法
        1.5.1 细胞培养
        1.5.2 病毒转染
        1.5.3 实时定量PCR(q-PCR)检测自噬和凋亡基因
        1.5.4 质粒扩增和提取
        1.5.5 使用过表达及干扰质粒转染T24细胞
        1.5.6 提取组织RNA并测定相应浓度
        1.5.7 Western blot检测细胞蛋白质水平
        1.5.8 流式细胞术测定细胞凋亡
        1.5.9 细胞免疫荧光
        1.5.10 统计学分析
2 结果
    2.1 膀胱癌细胞株T24中PLCε呈现高表达状态
    2.2 转染shPLCε慢病毒下调T24细胞中PLCε的表达
    2.3 转染shPLCε慢病毒促进T24细胞凋亡和自噬
    2.4 转染shPLCε慢病毒后,GLS和p-mTOR表达水平下降
    2.5 shPLCε通过抑制GLS/p-mTOR调节T24细胞自噬
3 讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]shPLCε通过下调CDC25A抑制T24细胞的瓦伯格效应[J]. 郝燕妮,李婷,范佳鑫,李罗,牛凌芳,欧俐苹,吴小候,罗春丽.  中国生物工程杂志. 2018(05)
[2]磷酯酶C家族新成员—磷酯酶CE1[J]. 王晓亮,彭志海.  医学分子生物学杂志. 2008(04)



本文编号：3661594