Erastin通过下调AR表达治疗去势抵抗性前列腺癌的实验研究

发布时间：2022-07-27 14:41

　　前列腺癌的发病率居男性恶性肿瘤的第二位,尽管各种早期治疗方法可以延缓肿瘤的进展,但多数患者会最终进展为去势抵抗性前列腺癌（castration-resistant prostate cancer,CRPC）。从前列腺癌进展为去势抵抗性前列腺癌的过程中,雄激素受体（Androgen Receptor,AR）及其剪切突变体发挥了重要作用。目前靶向AR的药物可延长患者约4个月的生存期,但是继之发生的AR扩增及剪切突变导致CRPC患者进一步产生耐药。爱拉斯汀（Erastin）是公认的铁死亡诱导剂,已在多种肿瘤细胞中验证了这一结论,如乳腺癌、肝癌、急性髓性白血病等,且机制并不完全相同,然而Erastin对前列腺癌的作用报道较少。同时Erastin诱导铁死亡过程中使细胞发生脂质过氧化,而前列腺癌细胞发生脂质过氧化后能下调细胞中AR的蛋白水平,那么Erastin是否影响AR的活化尚不清楚。为了明确Erastin对CRPC细胞是否具有抑瘤作用,本研究将CRPC细胞系22Rv1与LNCa P95作为研究对象,以不同浓度的Erastin分别作用24、48和72小时后,采用SRB法检测Erastin对CRP... 

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第一章 引言
    1.1 前列腺癌的发病进程
    1.2 CRPC与 AR信号通路的相关性
        1.2.1 AR基因扩增与突变
        1.2.2 AR剪切突变体
        1.2.3 AR共激活剂和共抑制剂
        1.2.4 类固醇生成途径的改变
        1.2.5 AR的异常激活
    1.3 CRPC的治疗药物及耐药机制
        1.3.1 CRPC一线化疗药物多西紫杉醇
        1.3.2 以雄激素轴为靶点的CRPC治疗药物
    1.4 铁死亡诱导剂爱拉斯汀(Erastin)
        1.4.1 Erastin诱导铁死亡的机制
        1.4.2 Erastin在肿瘤中的研究
第二章 材料与方法
    2.1 实验材料与仪器
        2.1.1 细胞与质粒
        2.1.2 实验试剂
        2.1.3 细胞培养相关试剂的配置
        2.1.4 SRB实验相关的试剂的配置
        2.1.5 SDS-PAGE凝胶电泳相关试剂的配置
        2.1.6 蛋白免疫印迹相关的试剂的配置
        2.1.7 实验仪器
    2.2 实验方法
        2.2.1 细胞培养
        2.2.2 SRB检测
        2.2.3 流式细胞术检测细胞死亡
        2.2.4 流式细胞术检测ROS
        2.2.5 生化法检测GSH、MDA
        2.2.6 蛋白免疫印迹(Western blot)
        2.2.7 q RT-PCR
        2.2.8 报告基因检测
        2.2.9 慢病毒包装AR-FL、AR-V7 表达质粒感染 22Rv1 细胞
        2.2.10 小鼠肿瘤模型的建立
        2.2.11 Western blot检测移植瘤组织蛋白的表达
        2.2.12 ELISA法检测血清中PSA的含量
        2.2.13 HE染色
        2.2.14 免疫组化实验
    2.3 统计分析
第三章 实验结果
    3.1 体外实验
        3.1.1 Erastin对CRPC细胞存活的影响
        3.1.2 Erastin诱导CRPC细胞死亡
        3.1.3 Erastin诱导CRPC细胞发生铁死亡
        3.1.4 Erastin下调CRPC细胞中AR-FL及AR-Vs蛋白水平
        3.1.5 Erastin下调CRPC细胞中AR-FL及AR-V7 m RNA水平
        3.1.6 Erastin降低CRPC细胞中AR启动子的活性
        3.1.7 Erastin促进CRPC细胞中AR蛋白的降解
        3.1.8 Erastin降低CRPC细胞中内源性AR的转录活性
        3.1.9 Erastin降低前列腺癌细胞中外源性AR的转录活性
        3.1.10 Erastin抑制CRPC细胞中AR-FL与AR-Vs特异性靶基因的表达
        3.1.11 上调AR-FL与AR-V7 后逆转Erastin对CRPC细胞的生长抑制
    3.2 体内实验
        3.2.1 Erastin降低裸鼠皮下移植瘤的生长
        3.2.2 Erastin降低小鼠血清中PSA的水平
        3.2.3 Erastin下调移植瘤组织中AR-FL及AR-Vs的表达
        3.2.4 Erastin对移植瘤组织中m RNA水平的影响
        3.2.5 Erastin未对裸鼠体重产生影响
        3.2.6 Erastin未对小鼠脏器形态学产生影响
    3.3 Erastin增强多西紫杉醇的生长抑制能力
第四章 讨论
第五章 结论
参考文献
作者简介及在学期间所取得的科研成果
致谢



本文编号：3665640