MicroRNA-26a与糖尿病肾病足细胞损伤的关系及机制探讨

发布时间：2022-08-01 19:16

　　目的:通过检测2型糖尿病（T2DM）大鼠模型肾组织及高糖刺激的足细胞中microRNA-26a（miR-26a）、瞬时受体电位阳离子通道蛋白6（TRPC6）及nephrin的表达水平,旨在探讨miR-26a与DKD足细胞损伤的关系及其可能机制。方法:1.在30只8周龄雄性SD大鼠中随机选取20只高脂高糖喂养联合小剂量链脲佐菌素腹腔注射（STZ,30 mg/kg）构建T2DM大鼠模型,余10只设为正常对照（NC）组。造模成功后留取血、尿及肾脏标本。比较两组大鼠空腹血糖（FBG）、胆固醇（TC）、三酰甘油（TG）、低密度脂蛋白（LDL）、高密度脂蛋白（HDL）、血肌酐（Scr）、内生肌酐清除率（Ccr）、24 h尿白蛋白（UAL）及其排泄率（UAE）等生化指标;在光镜、电镜下观察肾脏病理、足细胞超微结构改变;采用免疫组织化学技术检测瞬时受体电位阳离子通道蛋白6（TRPC6）表达、RT-PCR方法检测肾脏miR-26a、nephrin及TRPC6基因表达水平。应用Western-blot测定Nephrin,TRPC6蛋白表达水平。2.将小鼠永生化足细胞（MPC5）分为三组:正常糖（NG）组;... 

【文章页数】：53 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
引言
材料与方法
    1.研究对象与材料
        1.1 研究对象
        1.2 主要仪器
        1.3 主要实验试剂及耗材
        1.4 主要实验试剂配制
    2.实验方法与步骤
        2.1 动物的分组与饲养
        2.2 细胞分组
        2.3 建立T2DM大鼠模型
        2.4 标本采集
        2.5 标本检测
        2.6 肾组织病理形态学观察
        2.7 免疫组化染色
        2.8 Western-Blot检测大鼠肾组织TRPC6和nephrin表达
        2.9 RT-PCR肾组织检测TRPC6、nephrin m RNA和 miR-26a
        2.10 细胞培养
            2.10.1 足细胞复苏
            2.10.2 足细胞传代
            2.10.3 足细胞冻存
        2.11 Western-Blot检测各组足细胞TRPC6和nephrin表达
        2.12 RT-PCR检测足细胞TRPC6、nephrin m RNA和 miR-26a
        2.13 统计学分析
结果
    1.动物实验
        1.1 大鼠DKD模型建立
        1.2 比较两组大鼠生化指标
        1.3 光镜下大鼠肾组织病理改变
        1.4 电镜下大鼠肾组织足细胞超微结构
        1.5 大鼠肾组织免疫组化
        1.6 大鼠肾组织nephrin、TRPC6 m RNA和 miR-26a的表达及相关性分析
            1.6.1 大鼠肾组织miR-26a的表达
            1.6.2 大鼠肾组织nephrin、TRPC6 m RNA的表达
            1.6.3 大鼠肾组织nephrin、TRPC6 m RNA与 miR-26a相关性分析
            1.6.4 足细胞miR-26a与 UAL的相关性分析
        1.7 大鼠组织nephrin、TRPC6 蛋白的表达及分析
    2.细胞实验
        2.1 各组足细胞nephrin、TRPC6 m RNA和 miR-26a的表达及相关性分析
            2.1.1 各组足细胞miR-26a的表达
            2.1.2 各组足细胞nephrin、TRPC6 m RNA的表达
            2.1.3 足细胞nephrin、TRPC6 m RNA和 miR-26a的相关性分析
        2.2 各组足细胞nephrin、TRPC6 蛋白的表达及分析
讨论
结论
参考文献
综述
    参考文献
攻读学位期间的研究成果
附录 或缩略词表
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]他克莫司对2型糖尿病大鼠足细胞氧化应激的影响[J]. 武国华,马瑞霞,张伟,王彤,孙益婷.  中华肾脏病杂志. 2016 (04)
[2]他克莫司通过减少肾小球足细胞凋亡降低2型糖尿病大鼠尿白蛋白[J]. 马瑞霞,李作林,宋起,武国华,徐岩.  中华高血压杂志. 2016(03)



本文编号：3668024