褪黑素通过抑制内质网应激缓解小鼠睾丸损伤和精原干细胞凋亡

发布时间：2022-12-10 02:32

　　男性不育主要与遗传缺陷,环境毒物和具有生殖毒性的医学治疗等有关。男性不育的病因是精子产生或精子运输异常,其中精原干细胞功能受损导致精子发生异常是主要原因。白消安（Busulfan）早期主要作为传统化疗药,目前广泛应用于慢性髓性白血病患者造血干细胞移植的预处理,它虽然能提高患者生存率,但会通过损伤睾丸并减少精子数量导致男性不育。因此,研究白消安损伤睾丸机理,并寻找新的方法减少其副作用是十分必要的。内质网应激（Endoplasmic reticulum stress,ERS）在正常生理条件下的主要作用是维持细胞的稳态,但是,持续的内质网应激会引起癌症、炎症、神经退行性疾病和代谢性疾病等。内质网应激在发育、代谢和免疫等方面的重要作用已在多种细胞类型中得到证实。干细胞具有自我更新和分化成各种细胞的能力。干细胞存在于各个组织中,参与发育、组织更新以及某些疾病过程。精原干细胞是精子发生和雄性生殖的关键。虽然有研究表明内质网应激引起的凋亡可能与某些环境毒物有关,但是内质网应激在精原干细胞凋亡中的作用机制还未阐明。褪黑素是由松果体合成的一种吲哚类激素,它具有抗氧化、抗炎和抗肿瘤等作用。褪黑素能与特定的... 

【文章页数】：61 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
文献综述
    第一章 褪黑素在精原干细胞和内质网应激中的研究进展
        1.1 精原干细胞与雄性生殖
            1.1.1 精原干细胞
            1.1.2 精子发生
            1.1.3 雄性生殖调控
        1.2 褪黑素
            1.2.1 褪黑素的特点
            1.2.2 褪黑素的作用
            1.2.3 褪黑素的受体及信号通路
            1.2.4 褪黑素与雄性生殖
            1.2.5 褪黑素在干细胞中的应用
        1.3 内质网应激
            1.3.1 内质网应激的分子机制
            1.3.2 内质网应激与雄性生殖
            1.3.3 内质网应激在干细胞中的作用
        小结
试验研究
    第二章 白消安对小鼠睾丸和精原干细胞的影响
        2.1 材料
            2.1.1 试验材料
            2.1.2 试验试剂
            2.1.3 试验仪器
        2.2 方法
            2.2.1 主要试剂配制方法
            2.2.2 睾丸形态学分析
            2.2.3 睾丸石蜡切片制作
            2.2.4 小鼠睾丸组织切片HE染色
            2.2.5 提取睾丸组织总RNA
            2.2.6 RNA反转录为cDNA
            2.2.7 实时荧光定量PCR
            2.2.8 小鼠睾丸组织的蛋白样提取
            2.2.9 Westernblotting检测
            2.2.10 小鼠睾丸组织切片特异性蛋白免疫荧光染色分析
            2.2.11 小鼠精原干细胞细胞培养与传代
            2.2.12 流式细胞术细胞凋亡检测
            2.2.13 细胞免疫荧光染色
            2.2.14 数据处理
        2.3 结果
            2.3.1 白消安造成小鼠睾丸损伤和生殖细胞退化
            2.3.2 白消安引起睾丸中生殖细胞凋亡
            2.3.3 白消安造成小鼠精原干细胞凋亡
            2.3.4 白消安引起小鼠睾丸发生内质网应激
        2.4 讨论
        2.5 小结
    第三章 褪黑素缓解白消安引起的小鼠睾丸损伤和精原干细胞凋亡机理
        3.1 材料
            3.1.1 试验材料
            3.1.2 试验试剂
            3.1.3 试验仪器
        3.2 方法
            3.2.1 主要溶液的配制
            3.2.2 试验分组及处理
            3.2.3 精子吉姆萨染色
            3.2.4 流式细胞术检测细胞周期
            3.2.5 EdU细胞增殖检测
            3.2.6 细胞免疫荧光染色
            3.2.7 细胞钙离子检测
        3.3 结果
            3.3.1 褪黑素能够缓解白消安引起的小鼠睾丸损伤
            3.3.2 褪黑素能够促进小鼠睾丸和精原干细胞中褪黑素受体的表达
            3.3.3 褪黑素能够抑制小鼠睾丸中生殖细胞发生内质网应激
            3.3.4 褪黑素能够缓解小鼠睾丸中生殖细胞的凋亡
            3.3.5 褪黑素抑制白消安引起的小鼠精原干细胞凋亡
            3.3.6 褪黑素能够促进小鼠精原干细胞增殖
            3.3.7 褪黑素能够抑制精原干细胞内质网应激信号通路的激活
        3.4 讨论
        3.5 小结
结论
创新点
下一步研究课题
参考文献
附录 1
附录 2
致谢
作者简介


【参考文献】：
期刊论文
[1]内质网应激与哺乳动物雄性生殖[J]. 崔艳华,华进联,彭莎.  中国生物化学与分子生物学报. 2016(08)



本文编号：3715874