棕榈酰化蛋白质组学分析揭示前列腺癌细胞中雄激素促进代谢相关蛋白棕榈酰化修饰

发布时间：2022-12-10 06:39

　　目的:筛选棕榈酰化修饰水平受雄激素诱导的蛋白,探索前列腺癌去雄激素治疗外其他潜在的治疗靶点。方法:以LNCa P细胞为研究对象,雄激素（Methyltrienolone,R1881,5 nmol/L）或DMSO（dimethyl sulfoxide）处理LNCa P细胞24 h,同时利用人工合成的炔基棕榈酸Alk-C16 （100μmol/L）对细胞进行代谢标记,收集细胞,裂解,提取总蛋白,加入标记有叠氮化物的琼脂糖珠（1 mmol/L）,室温反应1 h,利用叠氮化物与Alk-C16末端炔基发生点击化学反应形成的共价键将棕榈酰化修饰蛋白富集在琼脂糖珠上,进行蛋白质谱非标记定量分析（label-free quantitation,LFQ）,比较R1881处理和非处理细胞蛋白棕榈酰化修饰变化情况,筛选棕榈酰化修饰水平受雄激素诱导的蛋白。结果:实验共鉴定出907个潜在的棕榈酰化修饰蛋白（mascot score＞ 2,P ＜0. 05）,其中有430个蛋白LFQ值至少有2次不为0。在这430个蛋白中有92个蛋白R1881处理与非处理样品LFQ比值大于1. 5 （P ＜0. 05）,说明雄激素... 

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
    1.2 抗体、试剂与仪器
    1.3 棕榈酰化蛋白质组学分析
        1.3.1 炔基棕榈酸合成
        1.3.2 细胞代谢标记及点击化学反应
        1.3.3 蛋白质谱分析及数据处理
    1.4 蛋白功能分析
    1.5 蛋白S-棕榈酰化修饰检测方法(羟胺还原法)
    1.6 统计学分析
2 结果
    2.1 受雄激素诱导的棕榈酰化修饰蛋白质组学分析
    2.2 受雄激素诱导的棕榈酰化修饰蛋白功能分类
    2.3 筛选棕榈酰化修饰受雄激素诱导的代谢相关蛋白
    2.4 雄激素促进细胞色素b-c1复合体亚基2棕榈酰化修饰
3 讨论



本文编号：3716266