罗沙司他预防用药通过Akt/GSK-3β/Nrf2途径介导抗铁死亡减轻叶酸引起的肾脏损伤

发布时间：2023-03-03 10:32

　　目的:急性肾损伤(Acute kidney injury,AKI)是指各种原因引起的短时间内肾功能快速减退而出现的一系列临床综合征,可逐渐进展为慢性肾脏病(Chronic kidney disease,CKD)。叶酸(Folic acid,FA)诱导肾损伤模型的病变特点是氧化应激引起肾小管损伤及进行性间质纤维化。大量活性氧的产生及抗氧化能力的下降是氧化应激介导肾小管上皮细胞损伤的公认机制。铁死亡是铁依赖的脂质过氧化反应而出现的细胞死亡,是AKI的主要原因之一。AKI与CKD密切相关,是CKD发生的独立危险因素。因此,有效预防用药改善AKI的预后有着重要意义。罗沙司他(FG-4592)是低氧诱导因子(Hypoxia inducible factor,HIF)脯氨酰羟化酶的抑制剂,是一种HIF稳定剂。近年来的研究发现HIF-1α具有抗氧化活性,在缺血性心脏病和脊髓损伤中有一定的保护作用。本研究应用FA诱导肾损伤模型,探讨FG-4592预防用药(pretreatment)对肾损伤的影响,并探讨其可能的作用机制。研究方法:1.建立FA肾损伤模型,实验组行FG-4592预防用药:本研究以6至8周...

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【学位级别】：博士

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摘要
Abstract
英文缩略语
第一部分 :FG-4592预防用药对FA诱导小鼠肾损伤保护作用的研究
    1 前言
    2 实验材料与方法
        2.1 主要试剂与仪器
            2.1.1 主要试剂
            2.1.2 主要仪器
            2.1.3 主要试剂的配制
        2.2 研究对象和分组
            2.2.1 实验动物
            2.2.2 动物分组和疾病模型的建立
        2.3 肾脏功能的测定
        2.4 HE染色及肾小管损伤评分
        2.5 Masson染色检测肾脏纤维化
        2.6 免疫组织化学染色检测肾脏炎症及纤维化相关蛋白的表达
        2.7 蛋白定量以及Western blot检测
            2.7.1 蛋白提取
            2.7.2 BCA法检测蛋白浓度
            2.7.3 Western blot检测
        2.8 统计学分析
    3 实验结果
        3.1 FG-4592预防用药减轻FA诱导小鼠急性肾小管的损伤
        3.2 FG-4592预防用药减轻FA诱导小鼠肾脏损伤早期的炎症
        3.3 FG-4592预防用药延缓FA诱导小鼠肾间质纤维化
    4 讨论
    5 结论
第二部分 :FG-4592预防用药减少FA诱导小鼠肾小管上皮细胞铁死亡的研究
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 主要仪器和试剂
            2.1.1 主要试剂
            2.1.2 主要仪器
            2.1.3 主要试剂的配制
        2.2 研究对象和分组
            2.2.1 实验动物
            2.2.2 动物分组
        2.3 肾脏功能的测定
        2.4 小鼠肾脏MDA,铁和GSH含量的测定
        2.5 HE染色及肾小管损伤评分
        2.6 普鲁士蓝铁染色
        2.7 免疫组织化学染色
        2.8 免疫荧光检测肾脏Nrf2蛋白的表达
        2.9 TUNEL染色检测细胞铁死亡
        2.10 总RNA提取以及Realtime-PCR检测
            2.10.1 总RNA提取
            2.10.2 m RNA逆转录获得c DNA
            2.10.3 PCR检测
        2.11 蛋白定量以及Western blot检测
            2.11.1 蛋白提取
            2.11.2 BCA法检测蛋白浓度
            2.11.3 Western blot检测
        2.12 统计学分析
    3 实验结果
        3.1 FG-4592预防用药减少FA诱导小鼠肾小管上皮细胞的铁死亡
        3.2 Fer-1处理进一步证明FA诱导小鼠肾小管上皮细胞铁死亡存在
        3.3 FG-4592 预防用药逆转FA诱导小鼠肾脏HIF-1α蛋白的表达下降
        3.4 FG-4592 预防用药增加FA诱导小鼠肾小管上皮细胞Nrf2 的激活
    4 讨论
    5 结论
第三部分 :FG-4592预防用药减少FA诱导肾小管上皮细胞铁死亡机制研究
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 主要试剂和仪器
            2.1.1 主要试剂
            2.1.2 主要仪器
            2.1.3 主要试剂的配制
        2.2 研究对象和分组
            2.2.1 实验动物
            2.2.2 动物分组
        2.3 蛋白定量以及Western blot检测
            2.3.1 蛋白提取
            2.3.2 BCA法检测蛋白浓度
            2.3.3 Western blot检测
        2.4 统计学分析
    3 实验结果
        3.1 FG-4592 预防用药对FA诱导小鼠肾脏Keap1 蛋白的影响
        3.2 FG-4592 预防用药激活FA诱导小鼠肾脏Akt/GSK-3β/Nrf2 信号通路
        3.3 Wortmannin抑制FG-4592 对小鼠肾脏Akt/ GSK-3β /Nrf2 信号通路的激活
    4 讨论
    5 结论
本研究创新性的自我评价
参考文献
综述
    参考文献
攻读学位期间取得的研究成果
致谢
个人简历



本文编号：3752674