尿毒症高转化骨病大鼠BM-MSC培养鉴定及增殖分化的信号转导机制

发布时间：2023-03-24 00:11

　　背景与目的：尿毒症高转化骨病与尿毒症状态下成骨细胞数量及功能的异常增加有密切关系,其确切机制目前尚未明确。骨髓间充质干细胞(BM-MSC)增殖并向成骨细胞分化是骨形成的细胞生物学基础,但目前尚无尿毒症高转化骨病大鼠BM-MSC体外培养及增殖、分化的报道。我们最近首次发现尿毒症高转化骨病大鼠骨髓基质细胞向成骨细胞分化的能力增加。本研究通过体外培养、鉴定尿毒症高转化骨病大鼠BM-MSC,观察其增殖、分化行为特征及相关的信号转导机制改变。 方法：取180-200g Sprague-Dawley雄性大鼠,制做5/6肾切除并高磷饮食(磷1.2%,钙1.0%)喂养的尿毒症高转化骨病组模型大鼠。以正常磷饮食(0.9%,钙1.0%)喂养的相同体重雄性大鼠作为对照组。12周后处死大鼠,取股骨和胫骨骨干,利用骨片贴壁分离筛选法原代培养BM-MSC.取第3代细胞,进行流式细胞仪鉴定BM-MSC分子标志(CD90+/CD34-/CD44+/CD45-)。采用MTT法观察尿毒症高转化骨病组大鼠与对照组大鼠BM-MSC细胞增殖行为改变,并应用流式细胞仪法检测BM-MSC中DNA含量,分析两组细胞之间细胞周期的差异...

【文章页数】：85 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
中文摘要
Abstract
缩略语/符号说明
前言
    研究现状、成果
    研究目的、方法
一、第一部分：尿毒症高转化骨病大鼠骨髓间充质干细胞原代培养(BMSCs)及鉴定
    1.1 对象和方法
        1.1.1 试剂
        1.1.2 仪器设备
        1.1.3 试验方法
    1.2 结果
        1.2.1 分离培养的尿毒症高转化骨病大鼠BM-MSC形态特征
        1.2.2 尿毒症高转化骨病大鼠BM-MSC细胞增殖动力学分析
        1.2.3 尿毒症高转化骨病大鼠BM-MSC的细胞周期和DNA倍体分析
        1.2.4 尿毒症高转化骨病大鼠BM-MSC细胞的分子标志鉴定
        1.2.5 尿毒症高转化骨病大鼠BM-MSC向成骨细胞分化能力的鉴定
    1.3 讨论
        1.3.1 本研究选择SD大鼠BM-MSC进行尿毒症高转化骨病发病机制研究的原因
        1.3.2 尿毒症高转化骨病大鼠BM-MSC鉴定中存在的问题
        1.3.3 体外环境对尿毒症高转化骨病大鼠BM-MSC表型的影响及思
    1.4 小结
二、第二部分：尿毒症高转化骨病组大鼠BMSC增殖、分化行为改变及其信号转导机制
    2.1 对象和方法
        2.1.1 试剂
        2.1.2 仪器设备
        2.1.3 实验步骤
    2.2 结果
        2.2.1 尿毒症高转化骨病组与对照组大鼠BM-MSC形态特征的比较及其对ERK1/2阻断剂U0126的反应
        2.2.2 尿毒症高转化骨病组与对照组大鼠BM-MSC增殖动力学的比较及其对ERK1/2阻断剂U0126的反应
        2.2.3 尿毒症高转化骨病组与对照组大鼠BM-MSC细胞周期的比较及其对ERK1/2阻断剂U0126的反应
        2.2.4 尿毒症高转化骨病组与对照组大鼠BM-MSC中ERK1/2细胞增殖信号转导通路活性的比较及其对ERK1/2阻断剂U0126的反应
        2.2.5 尿毒症高转化骨病组与对照组大鼠BM-MSC向成骨细胞分化能力的比较及其对ERK1/2信号通路阻断的反应
    2.3 讨论
        2.3.1 关于本研究中体外培养的尿毒症高转化骨病大鼠BM-MSC增殖、分化能力增强能否反映体内时细胞性状的思考
        2.3.2 尿毒症高转化骨病组大鼠BM-MSC增殖、分化能力增强的机制
        2.3.3 ERK 1/2信号转导通路在尿毒症高转化骨病大鼠BM-MSC增殖、分化能力增强中的作用
    2.4 小结
全文结论
论文创新点
参考文献
发表论文和参加科研情况说明
综述 Wnt信号通路对骨重构的调节作用研究进展
    综述参考文献
致谢



本文编号：3769038