抗菌肽LL37慢病毒复合体转染多能诱导干细胞的体外实验研究

发布时间：2023-04-01 17:30

　　目的:本研究通过构建pGC-FU-LL37-GFP慢病毒表达载体,转染多能诱导干细胞,在实现目的基因LL37稳定表达的前提下,验证其在组织工程中的促血管生成作用,并诱导iPSCs细胞分化为尿路上皮细胞,达到在体外获取种子细胞的目的。方法:(1)目的基因LL37的提取;(2)pGC-FU-LL37-GFP慢病毒表达载体的构建及测序鉴定;(3)pGC-FU-LL37-GFP慢病毒表达载体对小鼠多能诱导干细胞的转染及鉴定;(4)通过细胞计数实验、细胞迁移实验、血管成形实验证实转染后的iPSCs细胞的促血管生成能力;(5)诱导染后的iPSCs细胞向尿路上皮细胞分化,并鉴定分化后的细胞。实验结果应用GraphPad Prism 8软件绘制统计结果图,应用IBM SPSS 25.0统计分析软件进行数据处理。结果:(1)qPCR结果证实慢病毒表达载体pGC-FU-LL37-GFP构建成功,并且测序结果与目标序列完全一致;(2)在转染后的iPSCs细胞内,目的基因LL37融合了GFP共同表达;(3)qPCR检测iPSCs细胞内目的基因LL37 m RNA表达量较对照组提高(P<0.01);(4)...

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【学位级别】：硕士

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摘要
abstract
引言
第一章 材料与方法
    1 实验材料
        1.1 实验细胞
        1.2 主要实验试剂
        1.3 主要仪器和实验器械
    2 实验方法
        2.1 复合抗菌肽LL37的慢病毒表达载体的构建
        2.2 pGC-FU-LL37-GFP慢病毒表达载体转染i PSCs细胞
        2.3 转基因i PSCs细胞对HUVECs细胞的功能实验
        2.4 转染 pGC-FU-LL37-GFP 后的 iPSCs 细胞向尿路上皮细胞的分化实验
    3 统计学处理
第二章 结果
    1 目的基因LL37的扩增
    2 目的基因的鉴定
        2.1 重组质粒载体PCR鉴定
        2.2 目的基因LL37阳性克隆测序
        2.3 pGC-FU-LL37-GFP慢病毒表达载体转染鉴定
    3 转基因iPSCs细胞作用于HUVEC细胞实验结果
        3.1 HUVEC增殖实验结果
        3.2 HUVECs细胞迁移实验
        3.3 iPSCs细胞对HUVECs细胞促血管生成作用的检测
    4 转染pGC-FU-LL37-GFP的 iPSCs细胞向尿路上皮细胞分化结果
第三章 讨论
第四章 结论
参考文献
综述
    综述参考文献
附录 (缩略词表)
攻读学位期间的研究成果
致谢



本文编号：3777563