Renalase在糖尿病肾病发病机制中的作用

发布时间：2023-04-22 02:30

　　背景:肾胺酶(Renalase)是一种最近发现的分泌性黄素蛋白,在急性和慢性肾脏疾病的动物模型中均具有抗凋亡和抗炎作用,可减轻肾脏损伤。然而,Renalase对糖尿病肾脏疾病(Diabetic kidney disease,DKD)的肾脏保护作用还有待证实。本实验拟评估肾胺酶对糖尿病肾病的保护作用及其分子机制。方法:收集我院接受肾活组织检查的糖尿病肾病患者和其他无明显肾损伤DKD患者的临床资料,包括患者基本信息(年龄、性别)、肾脏损伤情况、相关临床指标、监测动脉收缩压和舒张压,并检测血尿素氮、血清肌酐以及肾小球滤过率估算值。从两组病人的肾活检标本中提取总RNA,评估肾胺酶在糖尿病肾病的肾脏表达水平。取10周龄的db/db糖尿病小鼠和db/m小鼠分为两组:实验组(db/db小鼠)、对照组(db/m小鼠)。两组小鼠于16周龄时接受安乐死,取肾脏组织提取总RNA和蛋白,检测小鼠肾脏中Renalase mRNA和蛋白的表达水平。评估Renalase在人和小鼠的肾脏中的表达水平是否相似。取10周大的同窝雄性db/db背景的Renalase基因敲除小鼠和db/m小鼠分为以下四组:db/db-Ren...

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中文摘要
Abstract
英文缩写词表
1.引言
2.实验材料与方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 主要仪器设备
        2.1.2 主要材料及试剂
    2.2 临床实验
        2.2.1 研究对象
        2.2.2 研究分组
    2.3 动物实验
        2.3.1 实验动物
        2.3.2 Renalase敲除小鼠的培育
        2.3.3 动物实验设计
        2.3.4 血压测定
        2.3.5 取材与保存
    2.4 体外实验
        2.4.1 细胞培养
        2.4.2 细胞分组
        2.4.3 转染
    2.5 血清肌酐测定
        2.5.1 原理
        2.5.2 步骤
        2.5.3 临床意义
    2.6 尿白蛋白测定
        2.6.1 原理
        2.6.2 步骤
        2.6.3 临床意义
    2.7 尿8-羟基脱氧鸟苷(8-hydroxy-2 deoxyguanosine,8-OHdG)测定
        2.7.1 原理
        2.7.2 步骤
        2.7.3 临床意义
    2.8 p21测定
        2.8.1 原理
        2.8.2 步骤
        2.8.3 临床意义
    2.9 血清儿茶酚胺(Catecholamine,CA)的测定
        2.9.1 原理
        2.9.2 步骤
        2.9.3 临床意义
    2.10 血清和尿液中Renalase的测定
        2.10.1 原理
        2.10.2 步骤
    2.11 促分裂原活化蛋白激酶3(MAPK3)的测定
        2.11.1 原理
        2.11.2 步骤
    2.12 eGFR测定
    2.13 肾组织石蜡包埋
        2.13.1 原理
        2.13.2 步骤
    2.14 肾组织PAS染色(过碘酸雪夫染色,糖原染色)
        2.14.1 原理
        2.14.2 步骤
        2.14.3 肾损伤评估
    2.15 Western blot检测蛋白
        2.15.1 原理
        2.15.2 提取蛋白质
        2.15.3 蛋白质定量
        2.15.4 蛋白质变性
        2.15.5 Western Blot
    2.16 RT-PCR检测目的基因表达
        2.16.1 原理
        2.16.2 步骤
    2.17 统计分析
3.实验结果
    3.1 Renalase在糖尿病肾病患者和db/db小鼠中的表达显著降低
    3.2 Renalase敲除加重db/db小鼠的肾损伤
    3.3 Renalase敲除后促进P21表达并加重肾小球系膜纤维化
    3.4 Renalase抑制高糖诱导的系膜纤维化基因和P21的表达
讨论
全文小结
    主要结论
    本论文创新性
    本论文的不足之处
    本论文的临床观点
参考文献
致谢
学术论文和成果



本文编号：3796734