抑制HIF-1α降解对糖尿病大鼠缺氧及血管生成因子的影响

发布时间：2017-05-20 06:19

  本文关键词：抑制HIF-1α降解对糖尿病大鼠缺氧及血管生成因子的影响，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:构建糖尿病大鼠模型,给予HIF-1α降解抑制剂(L-mimosine)处理,观察肾脏缺氧及血管生成因子相关因子基因和蛋白表达变化,评估L-mimosine对糖尿病肾脏的保护性作用。方法:使用链脲菌素(STZ)腹腔注射诱导构建SD大鼠糖尿病模型。设正常对照组(N组)、糖尿病组(D组)、L-mimosine治疗组(L组)。L组于糖尿病鼠成模8周后隔日腹腔注射L-mimosine(50mg/kg),于12周、16周后采血观察血糖、尿量以及24小时尿蛋白变化,同时处死大鼠,取肾脏组织,采用缺氧探针评估缺氧情况,免疫组化/荧光、western bloting和RT-PCR检测缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、血红素加氧酶-1(HO-1)、脯氨酸羟化酶2(PHD2)、血管内皮生长因子(VEGF)、促血管生成素-1(Ang-1)、促血管生成素-2(Ang-2)的表达变化。结果:1.两个糖尿病模型组血糖、尿蛋白水平均明显高于N组(P0.05),但L组尿蛋白明显低于D组(P0.01)。2.肾脏病理显示两个糖尿病模型组肾重指数明显增加,可见不同程度肾小球增大,部分球囊扩张、系膜基质增多、肾小管扩张,肾小管上皮细胞颗粒和空泡变性等,但L组病理改变相对减轻。3.肾组织缺氧探针免疫组化显示各个组均可见阳性染色,N组主要分布在髓质及皮髓交界,模型组扩大皮质区;两个糖尿病模型组的阳性着染面积明显高于N组(P0.01),其中L组阳性着染面积较D组明显减轻(P0.01)。4.免疫组化荧光及蛋白印迹显示:1HIF-1α主要表达于肾小管、肾小球细胞核及部分肾小管胞浆;两个糖尿病模型组肾组织HIF-1α均显著上调(P0.01),其中L组肾组织HIF-1α上调明显高于D组(P0.01),但16周较12周时下调(P0.01)。2HO-1主要表达于肾小管上皮细胞胞浆;两个糖尿病模型组肾组织HO-1均显著上调(P0.05),其中L组上调明显高于D组(P0.01), 但16周较12周下调(P0.01)。3PHD2主要表达于肾小管上皮细胞;两个糖尿病组PHD2蛋白表达均上调(P0.01),其中L组上调高于D组(P0.01)。4VEGF突出表达于肾小管上皮细胞及部分肾小球;两个糖尿病模型组VEGF表达显著上调(P0.01),其中L组较D组有所上调。5Ang-1突出表达于肾小球、肾小管及肾脏小血管;两个糖尿病模型组Ang-1表达均明显上调(P0.05),L组Ang-1蛋白表达明显高于D组(P0.05)。6Ang-2主要表达于肾小管、部分肾小球胞浆及胞核,以及肾脏小血管;两个糖尿病模型组肾组织Ang-2表达明显上调(P0.05),但两组间无统计学意义(P0.05)。5.RT-PCR结果显示:1两个糖尿病模型组肾组织HIF-1αm RNA表达均较N组上调,但仅L组存在显著统计学意义(P0.05),且16周较12周下调(P0.05)。2两个糖尿病模型组肾组织HO-1m RNA表达均上调,但仅16周L组有统计学意义(P0.05)。3两个糖尿病模型组肾组织PHD2m RNA表达均上调(P0.05),其中L组的表达高于D组,但无统计学意义(P0.05)。4两个糖尿病模型组肾组织VEGF m RNA表达均上调,且L组高于D组,但均无统计学意义(P0.05)。5两个糖尿病模型组肾组织Ang-1m RNA表达均上调,但仅L组升高存在显著统计学意义(P0.01),且L组明显高于D组(P0.05)。6两个糖尿病模型组肾组织Ang-2m RNA表达均上调,且L组高于D组,但均无统计学意义(P0.05)。6.指标相关性分析:1缺氧探针面积与尿蛋白呈正相关(r=0.808,P0.05),HIF-1α、HO-1与缺氧探针面积(r=-0.726,r=-0.826,P0.05)、蛋白尿(r=-0.882,P0.01;r=-0.793,P0.05)与呈负相关。2缺氧探针面积与Ang-1、Ang-2、VEGF(r=-0.757,r=-0.818,r=-0.791,P0.05)呈负相关。HIF-1α、HO-1与Ang-1(r=0.960,P0.01;r=0.793,P0.05)、Ang-2(r=0.739,P0.05;r=0.941,P0.01)、VEGF(r=0.962,P0.05;r=0.872,P0.01)呈正相关。结论:1.L-mimosine可改善1型糖尿病鼠肾缺氧状态;2.L-mimosine改善1型糖尿病鼠肾缺氧作用可能与上调HIF-1α、HO-1因子表达相关;3.L-mimosine可以显著上调1型糖尿病鼠肾Ang-1的表达,有助改善糖尿病肾脏微血管病变。
【关键词】：糖尿病肾病 缺氧 L-含羞草素 低氧诱导因子 血管生成因子
【学位授予单位】：遵义医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R587.2;R692.9
【目录】：

• 中英缩略词对照表5-6
• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-13
• 第一部分 抑制 HIF-1α 的降解对糖尿病大鼠缺氧的影响13-58
• 前言13-14
• 材料与方法14-24
• 结果24-50
• 讨论50-53
• 实验不足53
• 结论53-54
• 参考文献54-58
• 第二部分 抑制 HIF-1α 的降解对血管生成相关因子的影响58-83
• 引言58
• 材料与方法58-60
• 结果60-77
• 讨论77-79
• 不足之处79
• 结论79-80
• 参考文献80-83
• 综述83-92
• 参考文献89-92
• 致谢92-93
• 作者简介93

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本文编号：380837