TIM-1信号通路在IgA肾病大鼠发病机制中的作用

发布时间：2017-05-20 09:15

  本文关键词：TIM-1信号通路在IgA肾病大鼠发病机制中的作用，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:观察Ig A肾病(Ig A nephropathy,Ig AN)大鼠和正常大鼠中T细胞免疫球蛋白与黏蛋白域基因-1(T-cell immunoglobulin domain and mucin domain-1,TIM-1)信号通路与多种T细胞亚群的表达关系,初步探讨TIM-1信号通路在Ig AN发病中的作用和机制。方法:1.实验动物分组及实验性Ig AN大鼠模型的建立:随机将20只SPF级SD雄性大鼠分为Ig AN模型组及正常对照组。Ig AN模型组予0.1%牛血清蛋白(BSA)溶液隔日灌胃+CCL4蓖麻油混合剂皮下注射/周+脂多糖(LPS)尾静脉注射2次,以建立大鼠实验性Ig AN模型;正常对照组则以等体积PBS溶液灌胃+等体积生理盐水皮下注射及尾静脉注射。2.大鼠实验性Ig AN模型的鉴定及观察指标:观察大鼠一般情况及大鼠24h尿蛋白定量、血白蛋白、肾功能等指标变化,第9周末摘取大鼠肾脏行HE染色及Ig A免疫荧光,以鉴定大鼠实验性Ig AN模型的建立,并进行大鼠肾脏病理损伤的Katafuchi评分。同时免疫组织化学法检测两组大鼠肾组织中TIM-1,IL-4、IFN-γ及FOXP3的表达,实时荧光定量法检测两组大鼠肾组织中TIM-1 m RNA含量。3.比较两组间临床指标,病理损伤Katafuchi评分,TIM-1 m RNA含量,TIM-1、IL-4、IFN-γ及FOXP3免疫组化表达半定量积分的差异,并分别分析Ig AN组TIM-1 m RNA含量与临床指标、Katafuchi评分相关性及TIM-1半定量积分与IL-4、IFN-γ及FOXP3免疫组化表达半定量积分相关性。结果:1.两组大鼠一般情况变化;Ig AN模型组大鼠在实验初期一般情况对比正常对照组无明显差异,自第6周后出现萎靡、少动,体重增长减缓,第8周后上述症状加重。同时对比正常对照组体重增长情况,自第6周末大鼠体重增长明显减缓,差异无统计学意义(P0.05)。Ig AN模型组大鼠第4、9周末24尿蛋白定量显著增加,高于正常对照组,差异有统计学意义(P0.01);Ig AN模型组大鼠第4、9周末血白蛋白显著下降,低于正常对照组,差异有统计学意义(P0.01);两组大鼠血肌酐均无明显升高,两组间对比差异无统计学意义(P0.05)。2.两组大鼠肾脏病理改变及肾脏病理损伤评分:正常对照组大鼠肾组织Ig A免疫荧光为阴性,光镜下可见正常肾小球结构,小管、间质无明显改变;Ig AN模型组肾组织Ig A免疫荧光则可见沿系膜区有不同程度沉积,光镜下见肾小球弥漫性轻、中度系膜增宽,系膜细胞增生,肾间质见纤维化伴炎细胞浸润。大鼠Katafuchi评分为Ig AN模型组(6.30±1.95)显著高于正常对照组(1.30±0.82),差异有统计学意义(P0.01)。3.免疫组织化学检测结果:TIM-1在正常对照组于肾小管胞浆少量阳性表达,而在Ig AN模型组于肾小球胞核和肾小管胞浆中广泛阳性表达,定量积分对比显著升高且差异有统计学意义(P0.01)。IL-4在正常对照组于肾小管胞浆少量阳性表达,而在Ig AN模型组于肾小管胞浆中广泛阳性表达,定量积分对比显著升高且差异有统计学意义(P0.01)。IFN-γ在正常对照组和Ig AN模型组均只在肾小管胞核中有少量阳性表达,定量积分对比差异无统计学意义(P0.05)。FOXP3在正常对照组和Ig AN模型组均只在肾小球胞核中有少量阳性表达,定量积分对比差异无统计学意义(P0.05)。4.实时荧光定量法检测结果Ig AN模型组肾脏TIM-1 m RNA的相对表达量显著高于正常对照组,差异有统计学意义(P0.01)。5.相关性分析结果在Ig AN模型组中,肾组织TIM-1表达量与24h尿蛋白定量及Katafuchi评分呈正相关,与血白蛋白呈负相关,但均无统计学意义(P0.05)。在Ig AN模型组中,肾组织TIM-1表达量与肾组织表达IL-4呈正相关且有统计学意义(P0.05),肾组织TIM-1表达量与肾组织表达IFN-γ呈正相关,与IFN-γ/IL-4呈负相关,与肾组织FOXP3表达无相关性,但均无统计学意义(P0.05)。结论:1.本研究建立以BSA+CCl4+LPS诱导的大鼠Ig AN模型,并发现TIM-1m RNA的表达上调,且与Ig AN大鼠的24尿蛋白定量,肾脏病理组织学损伤程度正相关,提示TIM-1信号通路可能参与大鼠Ig AN的发病及进展。2.Ig AN大鼠肾组织中TIM-1与IL-4表达均上调并呈正相关,提示TIM-1信号通路可能参与调控Th2优势反应,而参与Ig AN的发病。3.Ig AN大鼠肾组织中TIM-1的表达与IFN-γ/IL-4表达呈负相关,提示TIM-1信号通路可能通过调控Th1/Th2平衡来参与Ig AN的发病。
【关键词】：IgA肾病 TIM-1 IL-4 IFN-γ FOXP3
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R692.31
【目录】：

• 摘要3-6
• Abstract6-12
• 第1章 引言12-14
• 第2章 材料与方法14-22
• 2.1 材料14-15
• 2.1.1 实验动物14
• 2.1.2 主要试剂14
• 2.1.3 主要仪器14-15
• 2.2 方法15-21
• 2.2.1 主要溶液配置15
• 2.2.2 动物模型的建立、分组及鉴定15-16
• 2.2.3 一般情况评价及标本的获取和处理16
• 2.2.4 苏木素-伊红(hematoxylin and eosin ,HE)染色16-17
• 2.2.5 IHC法检测小鼠结肠黏膜内TIM-1、IL-4、IFN-γ 及Foxp3蛋白的表达17-18
• 2.2.6 实时荧光定量法（Realtime-PCR,RT-PCR）检测大鼠肾组织中TIM-1 mRNA表达18-21
• 2.3 统计学处理21-22
• 第3章 结果22-31
• 3.1 两组大鼠一般情况比较22
• 3.2 两组大鼠 24h尿蛋白定量比较22-23
• 3.3 两组大鼠血生化指标比较23
• 3.4 两组大鼠肾脏病理比较23-25
• 3.5 IHC法检测大鼠肾脏TIM-1、IFN-γ、IL-4、Foxp3的表达25-27
• 3.5.1 大鼠肾脏TIM-1 的表达25
• 3.5.2 大鼠肾脏IFN-γ 的表达25
• 3.5.3 大鼠肾脏IL-4 的表达25-26
• 3.5.4 大鼠肾脏Foxp3的表达26-27
• 3.6 RT-PCR检测大鼠两组大鼠肾脏TIM-1mRNA的含量27-28
• 3.7 TIM-1 表达与各个临床及病理指标间的相关性分析28-31
• 第4章 讨论31-34
• 4.1 实验性IgAN大鼠模型的构建31
• 4.2 IgAN与多种效应性T细胞关系31-32
• 4.3 TIM-1 与肾脏病的关系32
• 4.4 TIM-1 与IFN-γ、IL-4、Foxp3的关系32-34
• 第5章 结论与展望34-35
• 5.1 结论34
• 5.2 展望34-35
• 致谢35-36
• 参考文献36-39
• 攻读学位期间的研究成果39-40
• 综述40-49
• 参考文献46-49

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前5条

1 张静;李静;桑晓红;刘健;王丽娜;苗娜;;运用两种BSA剂量建立IgA肾病大鼠模型观察[J];中国中西医结合肾病杂志;2013年01期

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3 王新亭;郑鹏远;罗予;刘志强;张利利;;TIM1与TIM4对小鼠食物过敏模型中CD4~+CD25~+调节性T细胞功能的影响[J];世界华人消化杂志;2009年34期

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本文编号：381204