前列腺癌中多重信号通路的表达检测

发布时间：2023-05-10 18:11

　　目的：观察良性前列腺增生组织与前列腺癌组织中多重肿瘤相关信号通路关键基因的表达差异情况,了解前列腺癌重要相关基因的相互关系,从系统的角度分析PCa相关生物分子的交互网络,揭示PCa发生发展的动态过程,从而为筛选有效的前列腺癌治疗药物和方案提供新线索。 方法：用德国Qiagen公司人前列腺癌的RT2Profiler PCR Array基因芯片筛选良性前列腺增生组织与前列腺癌组织中相关信号通路的关键基因,并用荧光定量RT-PCR检测筛选出的关联基因mRNA在良性前列腺增生组织与前列腺癌组织中的表达。所有数据采用SPSS15.0统计软件进行统计分析。 结果：RT2Profiler PCR Array基因芯片筛选出17个兴趣基因,将这17个兴趣基因导入在线基因网络数据库得到8个关联基因构成的网络调控模拟图,而AKT1和EGFR是该交互网络的中枢节点。8个关联基因在良性前列腺增生组织与前列腺癌组织中的相对表达量有统计学意义(P<0.05)。 结论：EGFR、FASN与GSTP1等17个兴趣基因可能与前列腺癌的发生、发展及转移密切相关；KT-1、KLK-3与IGF-1等8个目的基因构成网络调...

【文章页数】：84 页

【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
目录
1 绪论
2 材料与方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 组织标本收集
        2.1.2 主要实验仪器
        2.1.3 主要实验试剂
    2.2 荧光定量RT—PCR检测PCA中信号通路相关基因
        2.2.1 总RNA提取
        2.2.2 总RNA纯化
        2.2.3 总RNA纯度及浓度检测
        2.2.4 cDNA合成
        2.2.5 实时荧光定量PCR
        2.2.6 RT² PROFILER PCR ARRAY实验流程图
    2.3 荧光定量RT—PCR检测BPH与PCA中目的基因的表达差异
        2.3.1 引物设计合成
        2.3.2 组织总RNA提取与纯化
        2.3.3 总RNA纯度、浓度以及完整性检测
        2.3.4 逆转录反应
        2.3.5 荧光定量PCR反应
    2.4 数据处理与统计学分析
        2.4.1 荧光定量PCR数据处理
        2.4.2 统计分析
3 结果
    3.1 总RNA浓度及完整性鉴定结果
    3.2 荧光定量PCR扩增结果
        3.2.1 PCA和BPH组荧光定量PCR动力学曲线图
        3.2.2 PCA和BPH组荧光定量PCR融解曲线图
        3.2.3 BPH和PCA组荧光定量PCR的CT值
    3.3 PCRARRAY数据分析软件对原始CT值分析结果
        3.3.1 96基因在PCA与BPH中的相对表达及评价结果
        3.3.2 96基因在PCA与BPH组中构成的散点图
        3.3.3 84关键基因在PCA与BPH组中构成的热图
        3.3.4 17兴趣基因在PCA与BPH组中构成的柱形图
    3.4 GNCPRO数据分析软件模拟兴趣基因的交互网络
    3.5 统计结果
        3.5.1 BPH和PCA组的MANN—-WHITNEY U检验结果
        3.5.2 8个关联基因在BPH与PCA中的相对表达量比较
4 讨论
    4.1 改良法提取组织总RNA
        4.1.1 RNEAS YMINI KIT试剂盒提取组织总RNA
        4.1.2 TRIZOL法提取组织总RNA
        4.1.3 TRIZOL法提取组织总RNA后用试剂盒纯化
    4.2 前列腺癌相关信号通路基因的网络调控
        4.2.1 17兴趣基因在BPH和PCA的表达及其意义
        4.2.2 8个关联基因在PCA中的表达及其意义
        4.2.3 EGFR/PI3K/AKT信号通路在PCA中的网络调控作用
5 结论
参考文献
综述
    参考文献
附录一
附录二
攻读学位期间主要的研究成果
致谢



本文编号：3813253