Dab2基因在前列腺癌进展中的作用机制研究

发布时间：2023-05-10 23:32

　　已有研究证实,不同进展期前列腺癌细胞迁移和侵袭能力存在显著差异。为了揭示产生这一现象的原因,我们对两株不同阶段的前列腺癌细胞系PC3与LNCAP进行比较和研究。发现Dab2基因在这两株细胞中表达存在显著差异,并且细胞的侵袭和迁移能力随着Dab2基因表达升高而增强。我们还找到一组受Dab2调控的迁移相关基因,如迁移抑制基因Mmp9以及Rhob;迁移促进基因Fscn1,Pfn2及Wasp等,这些基因可能与Dab2相互作用而构成一个作用网络来调控前列腺癌细胞的迁移和侵袭。Dab2基因对PC3细胞迁移和侵袭能力的影响并不是通过影响细胞周期、细胞凋亡以及细胞增值来实现的,它有着自己独特的机制。在机制研究中我们发现miR-145能直接靶向作用于Dab2,并抑制Dab2的表达,进而抑制PC3细胞的迁移和侵袭能力。Dab2基因CpG岛甲基化分析结果显示,PC3细胞Dab2基因Cp G岛1甲基化水平显著高于LNCAP细胞。

【文章页数】：71 页

【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
绪论
1.引言
2. 材料与方法
    2.1 材料
        2.1.1 主要仪器设备
        2.1.2 抗体
        2.1.3 常用相关试剂
        2.1.4 自配试剂配方
    2.2 方法
        2.2.1 细胞培养
        2.2.2 Dab2过表达载体的构建
        2.2.3 Dab2 shRNA载体的构建
        2.2.4 病毒包装
        2.2.5 病毒感染目的细胞
        2.2.6 病毒感染目的细胞后的功能学研究
            2.2.6.1 流式细胞分析
            2.2.6.2 划痕实验
            2.2.6.3 Transwell细胞侵袭实验
        2.2.7 收集细胞抽RNA及Real-time PCR检测
        2.2.8 miRNA的抽提及Real-time PCR检测
        2.2.9 蛋白质的抽提及western blot分析
        2.2.10 ab2 DNA的启动子区域甲基化分析
3 结果
    3.1 PC3与LNCAP细胞的Dab2表达水平差异显著
    3.2 PC3细胞的侵袭能力显著强于LNCAP细胞
    3.3 Dab2表达水平的敲低显著影响PC3细胞的迁移和侵袭能力
        3.3.1 PC3与PC3-Dab2-shRNA细胞Dab2的表达量分析
        3.3.2 PC3与PC3-Dab2-shRNA细胞的迁移和侵袭能力分析
        3.3.3 PC3细胞与PC3-Dab2-shRNA细胞内迁移相关基因检测
        3.3.4 PC3与PC3-Dab2-shRNA细胞周期、增值、凋亡分析
    3.4 Migr1-Dab2转染后LNCAP细胞的侵袭能力显著提高
        3.4.1 LNCAP细胞与LNCAP-migr1-Dab2细胞Dab2表达量的分析
        3.4.2 LNCAP细胞与LNCAP-migr1-Dab2细胞侵袭能力分析
    3.5 miR-145能靶向调控Dab2的表达并影响前列腺癌细胞的迁移和侵袭能
        3.5.1 miR-145与Dab2基因的直接相互作用分析
        3.5.2 miR-145导入PC3细胞后Dab2基因的表达分析
        3.5.3 PC3细胞导入miR-145后细胞划痕实验
        3.5.4 PC3细胞导入miR-145后Transwell实验
    3.6 LNCAP与PC3细胞中Dab2基因CpG岛甲基化分析
        3.6.1 LNCAP细胞加入 5-AZA处理后Dab2基因的检测
        3.6.2 PC3细胞与LNCAP细胞中Dab2基因启动子甲基化分析
4.结论
参考文献
致谢



本文编号：3813715